雷氏大疣蛛毒素-V的分离纯化与初步活性鉴定.pdfVIP

第26卷第11期 怀化学院学报 Vo1．26．No．11 2 007年1 1月 JOURNAL OF HUAIHLIA LINIVERSlTY Nov．，2007 雷氏大疣蛛毒素一V的分离纯化与初步活性鉴定 曾雄智， 梁宋平 (湖南师范大学生命科学学院，湖南长沙 410081) 摘 要：雷氏大疣蛛 (Macrothele raveni)是最近发现的异仿蛛科大疣蛛属的蜘蛛新种．雷氏大疣蛛毒素一V就是 以该蜘蛛粗毒为原料．利用阴、阳离子交换层析和反相高效液相色谱分离纯化得到并命名的一种新型蜘蛛毒素．利 用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪分析得知它的相对分子质量为3133．48；通过初步活性研究证明雷氏大疣蛛 毒素一v是一种昆虫专一性神经毒素． 关键词：蜘蛛： 雷氏大疣蛛毒素一V； 离子交换层析； 反相高效液相色谱； 基质辅助激光解析电离飞行 时问质谱 中图分类号：Q516 文献标识码：A 文章编号：1671—9743(2007)l1—0053—03 动物毒素是一种重要的生命现象，它蕴涵着大量 购自美国Sigma公司，其余试剂均为国产分析纯 ． 奥妙复杂的生物信息 ．蜘蛛毒腺是蜘蛛在亿万年进化 1．1．3 仪器 高效液相色谱为美国Waters公司的650E 过程中形成的高度特化的器官，其分泌的毒液中含有 和515 HPLC系统，质谱仪为德国Bruker公司的Uhraflex 丰富多样、高效专一的生物活性分子，能够作为化学 MALDI—T0F／TOF． 防御武器来保存自身物种、捕食猎物、抵抗高等动物 1．2 方法 或疾病的侵袭 ．近年来的研究证明，蜘蛛毒液是有重 1．2．1 阳离子交换层析 要研究价值的生物活性物质 “富矿区”，许多已探明结 根据我们以前的研究报道_4 J，在配备有486检测 构的蜘蛛毒素多肽、蛋白质已成为开展神经生物学、 器的Waters 650E高级蛋白质纯化系统上，采用Waters 细胞生物学和蛋白质化学基础理论研究，天然创新药 CM(30 nm)填料，使用常压自装柱 (10 am×100 nlln) 物开发，农业生物技术应用的良好材料_1’ ．雷氏大疣 进行阳离子交换层析 ．洗脱系统为：(1)0．1 mol／L磷 蛛 (Macrothele raveni)是最近发现的异仿蛛科大疣蛛属 酸二氢钠；(2)0．1 mol／L磷酸氢二钠；(3)1．0 mol／L 新种_3 J，它分布在中国广西壮族自治区宁明县境内 ． 氯化钠；(4)双蒸水． 该蛛的个体比虎纹捕鸟蛛要小得多，大部分生活在热 1．2．2 阴离子交换层析 带与亚热带，主要以昆虫和其他节肢动物为食 ．本文 阳离子交换组分A(保留时间为4．1 min)经反相 报道从雷氏大疣蛛粗毒中纯化到一种新型抗虫活性多 脱盐后，用80％乙腈 (含0．1％TFA)洗脱，再采用 肽雷氏大疣蛛毒素一v Whatman DEAE纤维素填料，在常压自装柱 (10 am× 1130 mm)上进行阴离子交换层析 ． 1 材料与方法 1．2．3 反相高效液相色谱 1．1 材料 离子交换组分采用 Phenonmenex C18柱 (10 am× 1．1．1 蜘蛛 敬钊缨毛蜘蛛采集于海南省琼中县境内 250 am)在配备了2487检测器和Watem 5l5泵的高效 的山区，并在湖南师范大学蛋白质化学研究室进行人 液相色谱仪