胚胎干细胞201209.ppt

第五章 胚胎性干细胞 第一节 第一节 干细胞概论 一 、干细胞的定义和分类 二、 干细胞的研究发展 干细胞是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体. 干细胞具有无限增殖和自我修复能力，他们至少能分化为一种类型的机体细胞，其中胚胎干细胞具有体外培养无限增殖、自我更新和分化为三个胚层组织细胞的能力，因而被称为“万能细胞” 动物干细胞技术：就是通过各种方法获得干细胞，经体外培养建立细胞系，并对其进行定向分化诱导研究，以期获得需要的某一特定类型细胞。 2.分类 根据细胞分化潜能大小： 全能干细胞（totipotent stem cell） 三胚层多能干细胞（pluripotent stem cell ） 单胚层多能干细胞（multipotent stem cell ） 单能干细胞（monopotent stem cell ） 全能干细胞(胚胎干细胞)：具有形成完整个体的分化潜能。如：胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESCs，简称ES。） 具有很强的分化能力，可无限增殖并分化为全身200多种细胞类型，及机体的各种组织、器官。 什么是胚胎干细胞? 当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（Inner Cell Mass）的细胞即为胚胎干细胞(ES 细胞)。胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。 多胚层多能干细胞：指失去了发育成为完整个体的能力，但仍具有分化成个体中包括生殖细胞在内的多种细胞的潜能。 单胚层多能干细胞：只能分化成几种特定类型的细胞，分化潜能较窄。如:间充质干细胞。可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉及其他结缔组织，而不能分化为除此以外的其它组织。 单能干细胞：只能分化为一种细胞。如：成体干细胞中的神经干细胞。只能分化成神经元，而不能分化为显性胶质或少突胶质细胞。 根据细胞来源、发育阶段、分化趋势不同： 干细胞 ES细胞：存在于早期胚胎内细胞团的全能干细胞。 EG细胞：来自于早期胚胎嵴原始生殖细胞的多能干细胞。 EC细胞：来自于自发或诱发的生殖细胞瘤或畸胎瘤中的多能干细胞。 二、干细胞的研究发展简史 （一）胚胎干细胞 （二）胚胎生殖细胞 （三）成体干细胞 （一）胚胎干细胞 1.定义：ES细胞一般是 从发育早期的胚胎内细胞团中分离培养出来的一种具有自我更新、无限增殖能力的干细胞，细胞直径为12~15微米,细胞集落特征明显。 （3）Pease等（1994）借助重组白血病抑制因子（LIF）代替成纤维细胞饲养层，分离得到三个ES细胞系。 （4）Munsie等（2000）从以小鼠颗粒细胞为核供体构建的重组胚ICM中分离出了核移植ES细胞，它具有正常小鼠细胞的形态特征和细胞表面标记。 目前，小鼠ES细胞的分离方法基本成熟，已被广泛运用于生命科学研究的多个领域。 3.ES细胞的生物学特性 （1）来自正常的胚胎具有完整的二倍体核型； （2）体积小、核大、胞质少，有1或2个核仁，细胞间紧密的聚集在一起，细胞间界限不清，呈集落型生长，集落边缘清晰，遮光性强。 （3）表达早期胚胎细胞特异表达的基因，如：AKP(碱性磷酸酶 )、高端粒酶基因活性。 端粒（Telomere）是真核细胞染色体末端的特殊结构。人端粒是由6个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成。端粒有重要的生物学功能，可稳定染色体的功能，防止染色体DNA降解、末端融合，保护染色体结构基因DNA，调节正常细胞生长。正常细胞由于线性DNA复制5‘末端消失，随体细胞不断增殖，端粒逐渐缩短，当细胞端粒缩至一定程度，细胞停止分裂，处于静止状态。 端粒酶（Telomerase）是使端粒延伸的反转录DNA合成酶。是个由RNA和蛋白质组成的核糖核酸-蛋白复合物。其RNA组分为模板，蛋白组分具有催化活性，以端粒3末端为引物，合成端粒重复序列。端粒酶的活性在真核细胞中可检测到，其功能是合成染色体末端的端粒，使因每次细胞分裂而逐渐缩短的端粒长度得以补偿，进而稳定端粒长度。主要特征是用它自身携带的RNA作模板，以dNTP为原料，通过逆转录催化合成模板链5‘端DNA片段或外加重复单位。 端粒酶（Telomerase），在细胞中负责端粒的延长的一种酶，是基本的核蛋白逆转录酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端。端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用，端粒酶能延长缩短的端粒（缩短的端粒其细胞复制能力受限），从而增强体外细胞的增殖能力。端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，在肿瘤中被重新激活，端粒酶可能参与恶性转化。 （4）无限