葡聚糖凝胶.ppt

葡聚糖凝胶 原理 凝胶颗粒内部具有多孔网状结构，被分离的混合物流过层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶孔内外，在柱内经过的路程较长移动速度较慢，最后被洗脱出来。 凝胶的种类和性质 (1)交联葡聚糖凝胶（Sephadex) ? SephadexG ：G 后的数字为凝胶吸水值的10倍。G 反应凝胶的交联程度、膨胀程度和分部范围。 (2)琼脂糖凝胶（Sepharose; pharmacia;Bio-Gel(Blo-Rad) ? 依靠糖链之间的次级键维持网状结构，琼脂糖密度越大，网状结构越密集。 (3)聚丙烯酰胺 ? 一种人工合成的凝胶，以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联而成。交联剂越多，孔隙度越小。 ? 商品名为生物胶—P（Bio-Gel P). (4)聚丙乙烯凝胶（Styrogel) 大网孔结构。 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。 Sephadex LH20 的原理 Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。 假如使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保存弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保存强，后出柱。这是亲和力。 假如使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。这是分子包埋力。 凝胶层析的应用范围及其优点： ? 凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多 肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性，可对这些物质的溶液进行脱盐、浓缩、去热源和脱色。 ? 凝胶层析具有设备简单、操作方便、分离迅速及不影响分子生物学活性等优点。目前已被广泛应用于各种生化产品的分离和纯化。 谢 谢