采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定血液中分离的人型支原体.pdfVIP

·774· ．短篇论著． 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定血液中 分离的人型支原体 林豪芸梁训宏 陈茶吴文苑 laser 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(atrixassisted2．试剂与仪器：哥伦比亚羊血平板购于广州迪景微生物 ionization-timeof mass desorption flight spectrometry，MALDI-公司，MALDI·TOFMS仪器为法国梅里埃公司的全自动快速 TOF MS)技术是近年发展起来的一种软电离新型有机质谱， 微生物质谱检测系统(VITEKMS)，革兰染液购于珠海贝索 可在几分钟内直接对培养皿生长的或标本中本身的菌落进 生物技术有限公司，显微镜为日本奥林巴斯BXURA2显微 行鉴定分类。此种方法显著降低了耗材的成本和鉴定诊断 镜，解脲脲原体和人型支原体培养基试剂盒购于珠海爱普兰 的时间。其可靠性和准确性已在许多研究中被证明¨引。目 丽珠试剂公司，支原体固体培养基、全自动血培养系统 前，MALDI-TOFMS在微生物鉴定领域主要用于普通细菌及 3D (BacT／ALERTselect全自动血培养仪)购于法国梅里埃 真菌感染的鉴定，对于其他病原微生物的鉴定情况鲜有报 公司，BACTEC专用血培养瓶购于美国BD公司。 道，鉴定步骤亦复杂。 3．菌株分离培养：血培养仪报阳后均接种于5％哥伦比 支原体是一类大小约0．2～0．3仙m，无细胞壁、可通过亚羊血平板、巧克力平板和麦康凯平板(MacConkeyAgar) 细菌滤菌器、能在人工培养基上生长的原核生物。与人类有 上，在5％一10％CO：、35℃条件下培育24h后，哥伦比亚羊 关的支原体主要包括肺炎支原体、人型支原体、解脲脲原体 血平板上培养出细小、灰尘样不明显菌落，48h后菌落稍增 和生殖器支原体，其主要引起黏膜相关性的呼吸道、泌尿生 大，呈针尖样，半透明圆形轻微凸起，弱仅溶血(图I)。巧克 殖道感染，但偶尔可穿透到黏膜下层，侵入血液并播散到全 力平板上形态与哥伦比亚血平板相似(图2)，但生长更加缓 身各器官和组织。目前，在肺外和生殖道外支原体感染中， 慢。麦康凯平板上不生长。 人型支原体仍是引起人类致病的主要病原菌之一，且可在常 规的细菌培养中检测到HJ。早前有文献表明，由非生殖道标 本培养出的人型支原体能在羊血平板、马血平板、厌氧血平 板上生长∞…。 深圳市人民医院检验科微生物实验室于2014年10至 12月期间，分离培养出2株在哥伦比亚羊血平板上生长缓 慢，革兰染色阴性，镜下细微分辨不出形态，肉眼针尖样大小 的菌落，经MALDI．TOFMS对菌落直接进行分析，鉴定为人 Z 型支原体，鉴定值达99％。后经形态学检验、解脲脲原体和 人型支原体培养基试剂盒检测及16SrRNA基因序列测定，图l标本甲中分离出的人型支原体在哥伦比亚羊血平板上生 得到与MALDI—TOF MS一致的鉴定结果，遂确诊为血液内感 长48 h后，在划线一区、二区出现针尖样、圆形半透明的菌落 染的人型支原体。 (标本甲、标本乙培养情况一致) 图2标本甲中分离出的人 型支原体在巧克力平板上生长48 一、材料与方法 h后，在划线一区出现针尖 1．菌株来源：2株标本分别来自深圳市人民医院2014样、圆形菌落(标本甲、标本乙培养情况一致) 年10至12月经全自动血培养系统培养报阳的血液标本， 患者男