异源表达果糖转移基因研究-嘉南药理大学图书馆.PDF

理 異糖 類 CNBT93-04 行93 年1 1 93 年12 31 參 行 年 立異糖 了 pET 糖利 切利連 pET 切度 IPTG 糖 糖糖若 糖類 類益 類降降 (Ritsema, and Smeekens, 2003) 糖 糖利 糖糖 糖例 Aspergillus (Hidaka, et al. 1988) 數 糖都若 糖(Yanai et al. 2001) 糖不 立 糖糖若行 立異更 糖 Aspergillu japonicus 糖利 來立異 pET Tuner(DE3) 立了異 料 糖 Aspergillus japonicus PDB+20% 糖28Current protocol of Molecular Biology Aspergillus japonicus DNA(Ausubel et al. 2001) 糖 Aspergillus niger ATCC20611 列(intron) (Yanai et al., 2001)( fopA, Gene Bank AB046383) Aspergillus japonicus 糖 列異 利 fopA 來 forward 5’-CAGAATTCAATGAAGCTCACCAC TAC-3’ reverse 5’-CAGCCTTCTTTCTCTCCGGCCAGGCG-3’ 都 Eco RI 切利糖 Hibaid PCR 行 95 4 來 30 95 4 52 1.5 72 2 7215 agarose 兩 來 1.5kb 2.0kb 2.0kb Viogene 參 Eco RI Bam HI Sac I T4 DNA Ligase Promega 參說 pET21b Tuner(DE3) Invitrogen 參 Molecular Cloning (Sambrook and Russell, 2001) SDS 參 Laemmli (Laemmli, 1970) 12.5%C LB 37IPTG Tuner(DE3)LB OD 讀 1 0.2mM IPTG 600nm 30 論 利 1.5kb 2.0kb Aspergillus niger ATCC20611 糖 1965bp 2.0kb行 fopA 97% 度( 1249bp) fopA Sac I 切 1.5kb 利 來 pET21 Aspergillus japonicus 糖 2.0kb 7.5kb 若 Eco RI 切 2.0kb+5.5kb 兩 1.5kb Sac I 切 Bam HI Sca I切 7.0kb + 0.5kb lane1~15 Sac I Bam HI 切 agarose DNA