抗百菌清单克隆抗体的研制与鉴定-中国农业科学.pdf

中国农业科学 2013,46(7): 1509-1515 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.07.022 抗百菌清单克隆抗体的研制与鉴定 1,2 1 1 3 2 1 2 1 1 王玲玲 ，职爱民 ，杨艳艳 ，宋春美 ，王 坤 ，柴书军 ，侯玉泽 ，邓瑞广 ，张改平 1 2 （河南省农业科学院/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室，郑州 450002 ； 河南科技大学食品与生物工程学院， 3 河南洛阳 471003 ； 江南大学食品学院，江苏无锡 214122 ） 摘要：【目的】制备高灵敏、高特异性的百菌清(CTN)单克隆抗体，并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】将 CTN 进行化学修饰后引入羟基活性基团，合成具有半抗原结构特征的百菌清衍生物（CTN-OH）；采用N, N-羰基二 咪唑法（CDI）将CTN-OH 与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）偶联合成人工免疫抗原CTN-BSA 和包被抗 原CTN-OVA，用紫外分光光度法（UV）和凝胶电泳（SDS）进行鉴定后，免疫BALB/c 小鼠，利用间接ELISA 和间接竞争ELISA 测定其多抗血清效价和敏感性，选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合，经过多次亚克隆 筛选出分泌高敏感的特异性抗CTN 单克隆抗体的杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法制备抗CTN 的单克隆抗体并对其 免疫学特性进行鉴定。【结果】UV 和SDS鉴定结果显示，CTN-BSA 成功偶联，间接ELISA 检测显示免疫的3 4 -1 只小鼠效价均达1 ﹕10 以上，其中2 号小鼠多抗血清敏感性最好，半数抑制浓度IC 为93.593 ng·mL ，融合后筛 50 3 2 2 选出4 株杂交瘤细胞株1E8、1F4、2A10 和2E2，其细胞上清效价分别为1 ﹕1.6×10 、1 ﹕6×10 、1 ﹕6×10 、 2 5 -1 1 ﹕6×10 ，1E8 株腹水效价为1 ﹕5.12×10 ，抗CTN 单克隆抗体对CTN 的IC 为21.6685 ng·mL ，且具有较好的 50 特异性。 【结论】本试验成功合成了CTN 人工抗原，并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体，为CTN 免疫学