RNA干扰在组织特异性靶向性基因治疗中的研究进展.docVIP

　　RNA干扰在组织特异性靶向性基因治疗中的研究进展 【摘要】 　　RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术是一种有效的基因沉默技术，由于其高度特异性、高效性以及稳定性等特点，RNA干扰技术在肿瘤基因治疗研究中得到了广泛的应用。靶向性基因治疗是肿瘤生物治疗的一个重要研究方向。本文以RNA干扰技术在靶向性基因治疗中的研究进展进行综述。 【关键词】 RNA干扰 靶向性基因治疗 DF3 　　靶向性基因治疗是肿瘤生物学治疗中的一个重要方法，其中RNA干扰是一种在真核生物体中广泛存在的通过双链RNA分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因部分表达或完全抑制的过程。是研究基因功能、新基因筛选、基因治疗和寻找药物靶点的重要工具。 　　1 靶向性基因治疗 　　靶向治疗重点在于“靶向”，既能高效准确地杀伤癌细胞同时对正常的组织细胞很少损伤或不损伤。现在主要的方法有靶向基因病毒治疗、抗体治疗、RNA干扰技术、肿瘤干细胞、小分子靶向药物和纳米技术等［1］。许多改造后的病毒能选择性的在肿瘤内复制导致细胞裂解死亡，有良好的靶向性，但是单用病毒治疗，有时会出现杀伤力不足抑制效率低等问题，结合基因治疗和病毒治疗的各自优势，刘新垣［1］运用了一种靶向基因病毒治疗的新策略。其中病毒以溶瘤病毒为例，溶瘤病毒载体携带靶向基因，此种病毒载体可靶向在癌细胞内复制数百倍到数千倍，而病毒载体复制的同时其携带的靶向基因也同样增加了数百数千倍，因此大大增强了基因的杀伤力和特异性。在常用的靶向基因治疗的方法中，RNA干扰是由一种短的双链RNA诱发的mRNA降解，这个现象发生在转录后水平，所以又称为转录后基因沉默。RNAi只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA，具有很高的特异性和很高的效率。 　　2 RNA干扰技术在靶向性基因治疗中的应用 　　2.1 RNA干扰技术 　　RNA干扰技术是基因治疗中常用的重要技术之一。RNA干扰是由双链RNA引起的广泛存在于动植物中的序列特异性转录后基因沉默。作为高效、特异的调节基因表达的技术，已经成为基因功能研究的有力工具。RNA干扰现象与内源性的RNA降解有关，双链RNA能够非常特异的降解和其序列相应的单个内源基因的mRNA，但是对靶基因的内含子或者是启动子没有很明显的抑制效应，从而表现出高度的序列特异性，首先［2］是dsRNA在一种具有RNaseⅢ样活性的dsRNA特异性核酸内切酶（dsRNA specific endonuclease,Dicer）作用下，被酶切割成21～13nt的具有双链结构的小干扰RNA(siRNA)，这些siRNA与一种称为RNA诱导沉默复合物（RNAinduced silencing plex, RISC）的蛋白结合，在ATP的作用下siRNA双链结构解旋并诱导形成有活性的RISC，在此有活性的沉默复合物的作用下，其通过碱基配对定位到同源mRNA上，并在距离siRNA 3端的12个碱基的位置切割mRNA，实现降解目的mRNA的作用［3］。 　　dsRNA能够非常特异的降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA，无关序列的基因表达无干扰作用，这就决定了RNAi有非常严格的序列特异性。而且RNAi以21nt siRNA为中间产物，在酶复合体作用下降解mRNA，产生作用后就与底物分离，继续与另外一个底物结合，如此循环往复，高效率的降解mRNA。因此少量的siRNA就能抑制基因表达，表明了siRNA的高效性［4］。siRNA分子是3端有突出的非配对碱基的双链分子，在细胞内可稳定存在3～4天，半衰期长于寡聚核苷酸，有很高的稳定性。正是由于RNA干扰技术有严格的序列特异性、高效性和稳定性等特点，使其成为肿瘤基因治疗中的一个重要的方法。 　　2.2 RNA干扰靶点的选择 　　在肿瘤的靶向治疗中，治疗靶点的选择尤为重要。据文献报道［5］近9０%恶性肿瘤细胞和永生细胞有端粒酶活性表达，而且许多肿瘤细胞的端粒酶活性远高于那些高度增殖的正常细胞，甚至在一些肿瘤中端粒酶活性高低与恶性程度一致.端粒酶［6］是正常细胞向恶性肿瘤转化的关键性因子，端粒酶的活化被认为是肿瘤细胞永生化及无限增殖的重要环节。 　　因此，端粒酶是肿瘤靶向治疗的一个重要的靶点，现今对端粒酶的研究已经相当丰富而深入，端粒酶［7］是由端粒RNA和蛋白质组成的核糖核蛋白酶，主要作用［8］是弥补随着细胞有丝分裂逐渐缩短的端粒长度,防止染色体DNA降解、末端融合缺失和非正常重组，避免染色体融合和遗传信息的不稳定，避免细胞分裂停止及细胞衰老的发生，使某些增殖旺盛的细胞和肿瘤细胞的端粒保持动态平衡。 　　除了在肿瘤细胞中有端粒酶，在各种癌旁组织、癌前病变组织细胞中也都广泛存在。由于绝大多数肿瘤细胞都具有端粒酶活性，所以，抑制端粒酶活性为手段的基因疗法，对肿