survivin在非小细胞肺癌中表达的意义及其与.docVIP

　　survivin在非小细胞肺癌中表达的意义及其与 【摘要】 探讨survivin蛋白的表达在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展方面的作用及其与临床病理特征之间的联系，与caspase3及DFF45表达的相互关系。方法 运用免疫组织化学SP法对60例NSCLC、10例淋巴结转移癌、10例正常支气管粘膜上皮石蜡切片组织中survivin、caspase3及DFF45蛋白的表达进行检测。结果 NSCLC、淋巴结转移癌中survivin的阳性表达率分别为70％及90％，显著高于正常支气管粘膜上皮的阳性率10％（P＜0.01）。survivin在NSCLC中的表达与分化程度（P＜0.01）、TNM分期（P＜0.05）、淋巴结转移（P＜0.05）有关。而与年龄、性别、病理类型无明显相关（P＞0.05）。survivin表达与caspase3的表达呈负相关（P＜0.01；r=－0.335），而与DFF45的表达却呈正相关（P＜0.01；r＝0.406）。结论 survivin在NSCLC的发生、发展中起重要作用，可作为NSCLC的诊断指标，对NSCLC恶性程度的判断及预后也有一定参考价值。survivin的作用是通过抑制caspase3 的表达，从而影响下游凋亡途径而发挥作用的。 【关键词】 非小细胞肺癌 survivin 细胞凋亡 免疫组织化学 　　0 引言 　　自从1997年Ambrosini等[1]首次发现survivin与肿瘤的关系后，其日益成为肿瘤研究热点。survivin属于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族新成员，是具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的双功能蛋白。survivin选择性表达于包括肺癌在内的绝大多数恶性肿瘤，IAPs在凋亡途径的高度保守步骤是抑制效应酶caspase3等的活化或催化底物的活性，而使凋亡发生抑制。Shin等[2]进一步研究认为 survivin的二聚体与caspase二聚体以均称对等方式结合而抑制后者活性，caspase无法降解底物，从而使凋亡无法执行。本研究运用免疫组化SP法探讨survivin在肺癌中表达的意义及与临床病理特征的联系，在这方面目前观点不一，对肺癌中survivin表达与caspase3 、DFF45蛋白之间关系的研究目前也报道不多，本研究旨在为肺癌的诊断、治疗提供另一思路。 　　1 资料和方法 　　1.1 标本 　　80例标本随机取自湖北省肿瘤医院和东风总医院1999～2003年间病理存档的石蜡标本，所有手术患者术前均未接受过放、化疗，诊断均经常规病理切片证实，其中男43例，女37例，年龄35～76岁，平均年龄63岁。其中正常支气管粘膜上皮10例，淋巴结转移癌10例，60例NSCLC。 　　1.2 试剂 　　兔抗人survivin多克隆抗体、鼠抗人caspase3单克隆抗体均为美国SantaCruz公司的产品，兔抗人DFF45多克隆抗体和超敏SP试剂盒均为即用型，均购自北京中杉生物技术公司。 　　1.3 方法 　　采用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶连接(SP)染色法检测蛋白的表达，survivin抗体（高压修复，工作浓度为1∶100），caspase3抗体(微波修复，工作浓度为1∶100)和DFF45抗体(高压修复)。用PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性片作阳性对照。三种蛋白均采用37℃孵育1h，再放入4℃冰箱过夜，DAB显色，苏木素复染。 　　1.4 结果判断 　　survivin主要以胞浆中出现粗细不一的棕黄色为主，caspase3蛋白表达以胞浆内出现弥漫的棕黄色颗粒为主，DFF45蛋白表达主要是胞核呈棕黄色或棕褐色。在此基础上，参照文献[3，4]评分方法，首先将染色强度评为1～4分；再按阳性细胞所占的百分比评为0～4分。染色强度与阳性细胞的分值相加，≥3分为阳性(+)，每张切片选择有代表性的区域，在400倍视野下计数，共计5个视野，取其平均值，避免随意性。 　　1.5 统计学方法 　　所得数据用阳性率(%)表示，采用SPSS11. 5软件进行χ2检验和Pearson相关分析。P＜0.05为统计学差异有显著性。 　　2 结果 　　2.1 survivin蛋白的表达及意义 　　survivin蛋白主要表达在肿瘤细胞胞浆中成棕黄色，见图1。由表1可见，survivin在正常支气管粘膜上皮表达与肺癌组织、淋巴结转移癌中的表达差异有极显著性（P＜0.01）。 　　2.2 survivin的表达与肺癌临床病理特征的联系 　　由表2可见，survivin的表达与NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴结转移均相关(P＜0.05)，而与肺癌患者的年龄、性别、病理类型无明显相关性（P＞0