蚕蛹氨基酸大输液原粉制备方法的研究.pdfVIP

蚕蛹氨基酸大输液原粉制备方法的研究 中文摘要 本研究是采用酸法(盐酸)水解脱脂蚕蛹，通过离子交换吸附方法对蚕蛹蛋白水 解液进行氨基酸纯化。然后用活性炭和硅藻土吸附方法去除氨基酸溶液中的热原物 ， 质，浓缩、冷冻干燥至氨基酸原粉，并通过细菌内毒素试验和家兔热原实验对上述原 粉进行热原检测，结果表明热原检测符合要求，最终证明了由蚕蛹蛋白制备氨基酸大 输液原粉是完全可行的。此外，利用日立氨基酸自动分析仪(835．50)、瑞士全自动 索氏浸提仪(Foss2050)、 (AA．6501)、瑞士全自动凯 氏定氮仪(Foss2300)测 分四部分： 一、蚕蛹氨基酸原粉的制备 ， 下，水解脱脂蚕蛹24h。然后经过脱酸、上柱、阳离子交换树脂吸附纯化、洗脱、浓 缩、冷冻干燥等过程得到氨基酸原粉。实验结果表明，用盐酸水解24h，可以将蚕蛹 蛋白彻底水解，能基本保持所得氨基酸的生物活性，并且，所得氨基酸原粉中7种人 体必需氨基酸(色氨酸在水解时被酸破坏)的含量较高，氨基酸得率为40％。 二、蚕蛹复合氨基酸原粉中热原的去除 本试验应用活性炭吸附方法，去除氨基酸原粉中的热原。在脱氨后的氨基酸溶液 中，分别加入蚕蛹质量25％的针用活性炭和硅藻土，边加热边搅拌，吸附、过滤，浓 缩、干燥得氨基酸原粉，最后检测原粉热原。最终结果表明：用蚕蛹质量25％的活性 炭吸附，所得氨基酸原粉的热原检查合格。 三、蚕蛹复合氨基酸的热原检测 本实验用鲎试验法和动物实验(家兔法)两种方法检测蚕蛹复合氨基酸中的热原。 1、鲎试验法检测热原 鲎试验(LAL)是通过观察鲎试剂与微量热原物质发生反应，是否生成凝胶来判断 热原合格与否。按《中国药典》规定的方法，对鲎试剂进行灵敏度标定和干扰实验。 干扰实验是将活性炭和硅藻土吸附后的滤液浓缩，干燥成粉，然后将此氨基酸粉配制 成浓度为10％的溶液，并对溶液做4倍、8倍、16倍、32倍稀释进行干扰实验。结 果表明：用蚕蛹质量25％的活性炭吸附后的4倍、8倍、16倍稀释液均出现干扰作用， 32倍稀释液没有干扰作用。而在相同条件下，硅藻土吸附后氨基酸含量为10％的4 倍、8倍、16倍和32倍稀释液均表现为干扰。 热原检测按《中国药典》规定的细菌内毒素检查方法进行，对上述活性炭吸附后 的32倍氨基酸稀释溶液进行热原检测。实验结果表明：32倍的此氨基酸稀释液呈 阳性(+)反应，即热原的鲎试验检测为不合格。 原则上，鲎试验检测热原为阴性(一)者，即判断为热原合格。鲎试验热原检测 为阳性(+)者，再用家兔法检测，热原检测最终以家兔法为准，即鲎试验法检查为 阳性(+)，而家兔法检测没有出现热原反应，则热原判定为合格，相反，如果家兔法 检测时出现热原反应，则热原判定为不合格。 、 2、家兔法检测热原 ．． 家兔法检测热原是通过向家兔静脉中注射一定剂量氨基酸溶液，然后在规定时间 内测定家兔体温的变化，通过体温的变化值来确定热原是否合格。根据《中国药典》 1995年二部附录76规定的方法，用家兔法检测热原。结果表明：用蚕蛹质量25％的 活性炭吸附后，浓度分别为10％和’2％的氨基酸溶液热原检查均合格。 四、蚕蛹氨基酸大输液原粉的成分测定 氨基酸原粉成分的测定结果：氨基酸溶液经用蚕蛹质量25％的活性炭吸附后，以 此制得的氨基酸原粉中总氮量、灰分、重金属含量(以汞计)、水分分别为12．8％、 0．47％、1．05mg／kg和5．31％，粗脂肪没有检出?_、～ ／ 1 本研究结果表明，通过水解蚕蛹蛋白制备氨基酸大输液原粉方法基本可行，为进 ’f 一步研究开发该产品提供了一定的依据和技术参数。 关键词： 蚕蛹 水解氨基酸熟跌大输液鲎试验 引