结肠癌中RUNX3基因表达和启动子甲基化及其临床.docVIP

　　结肠癌中RUNX3基因表达和启动子甲基化及其临床 【摘要】 目的 探讨RUNX3基因表达和启动子甲基化在结肠癌发生发展过程中的作用及其临床意义。方法 采用RT-PCR方法检测RUNX3基因表达，用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测RUNX3基因启动子甲基化。结果 47例结肠癌中，癌旁肠粘膜、原发灶、肝转移灶中RUNX3表达阳性率分别为100%(47/47)、38.3%(18/47)、14.3%(1/7)。原发灶和肝转移灶中RUNX3表达明显降低(Plt;0.01)。癌旁肠粘膜组织、癌原发灶、肝转移灶组织中RUNX3基因启动子甲基化阳性率分别为10.6%(5/47)，44.7%(21/47)，57.1%(4/7)，3种组织RUNX3基因启动子甲基化率的差别有显著性意义(Plt;0.01)。在7例出现肝转移者中发生RUNX3失活者6例，其中4例(66.7%) 存在RUNX3基因启动子甲基化。结论 RUNX3基因启动子甲基化和RUNX3蛋白表达在结肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著的差异，可能与结肠癌的发生发展有关。 【关键词】 结肠癌;RUNX3;DNA甲基化 　　Abstract：Objective To study the function and clinic significance of expression and methylation of RUNX3 gene in promoter region in the genesis and progress of colon cancer.Methods Methylation specific PCR ethylation of RUNX3 promoter region. Expression of RUNX3 ined by RT-PCR. Results In 47 cases of colon cancer, RUNX3 expression oral mucous membrane, primary cancer foci and hepatic metastasis respectively. RUNX3 expression in primary foci and hepatic metastasis oral mucous membrane (Plt;0.01). Methylation of RUNX3 promoter in paratumour mucous membrane, primary foci and hepatic metastasis etastasis, 4 (57.1%) oter methylation. Conclusions Methylation of RUNX3 promoter leads to inhibition of RUNX3 gene in colon cancer. 　　Key RNA的表达。RUNX3上游引物：5′-GATGGCAGGCAATGACGA-3′，下游引物：5′-TGCTGAAGTGGCTTGTGGT-3′，扩增片段长度：353bp。GAPDH上游引物：5′-AACGGATTTGGTCGTATTG-3′，下游引物：5′-GGAAGATGGTGATGGGATT-3′，扩增长度：208 bp。 　　1.4 DNA的亚硫酸氢钠修饰 　　在50 μL体积中加入DNA 1 μg，NaOH(终浓度0.2 M)，于37 ℃变性10 min，加新鲜配置的对二苯酚(10 mM)30 mL和亚硫酸氢钠(3 M)52 μL，50 ℃，16 h。用SP分析RUNX3基因甲基化状态 　　采用MSP(methylation，specific PCR，MSP) 法对结肠癌RUNX3基因甲基化状态进行了检测。RUNX3甲基特异性引物，上游引物5′-CGTCGGGTTAGCGAGGTTTC-3′，下游引物5′-GCCGCTACCGCGAAAAACGA-3′。RUNX3未甲基化引物，上游引物5′-GTGGGTGGTTGTTGGGTTAGT-3′，下游引物5′-TCCTCAACCACCACTACCACA-3′。PCR反应总体积25 μL，其中含有经亚硫酸氢钠修饰后的DNA 3 μL，10×Ex Tag Buffer 2.5 μL，引物各1 μL，dNTP 2 μL，TaKaRa Ex Taq 0.5 μL。PCR 反应条件为首次95 ℃变性3 min，然后95 ℃变性30 s，63 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，最后72 ℃延伸5 min，共40个循环。取PCR产物5 μL，在2 %琼脂糖凝胶中电泳，紫外灯下照相。高云升：结肠癌中RUNX3基因表达和启动子甲基化及其临床意义辽宁医学院学报 2008年8月，29(