胃癌患者门静脉血CK20mRNA的检测及其临床意.docVIP

　　胃癌患者门静脉血CK20mRNA的检测及其临床意 【摘要】 目的 检测胃癌患者门静脉血细胞角蛋白20(CK20)mRNA，并探讨其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptase-polymerase chain reaction， RT-PCR）方法检测30例胃癌患者和10例腹腔良性疾病患者术中门静脉血CK20mRNA。结果 胃癌组门静脉血CK20mRNA检出率53.3%（16/30），对照组门静脉血CK20mRNA均为阴性。胃癌患者门静脉血CK20mRNA检出率与临床TNM期别、有无淋巴结转移相关（Plt;0.05），并与组织分化及肿瘤浸润深度密切相关（Plt;0.01）。结论 胃癌血行转移与有无淋巴结转移及TNM期别有关；与组织分化及浸润深度密切相关；有助于临床采取相应的治疗。 【关键词】 胃肿瘤；逆转录聚合酶链反应；细胞角蛋白20；转移 Detection of CK20mRNA in portal venous blood plication XIANG He-ping， ZHANG Chang-le.Department of Surgery， The Affiliated Hospital of Anhui Medical University， Anhui 230000，China 【Abstract】 Objective To detect Cytokeratin20(CK20) mRNA in portal venous blood from patients erase chain reaction(RT-PCR) RNA in portal venous blood from 30 patients y served as controls.Results The positive rate of CK20mRNA in portal venous blood RNA in portal venous blood ph node metastasis（P＜0.05），and also strongly correlated ph node metastasis and TNM classification， and also strongly correlated to the different gastric cancer cell line and the stage of the cancer； and it can be helpful to the therapy. 【Key ach neoplasm；reverse transcriptase-polymerase chain reaction；cytokeratin 20；metastasis 胃癌根治术后，血行转移是主要死亡原因之一，因此术前及术中早期检出血液中的癌细胞进而采取有效的阻断治疗，是提高疗效的关键，RT-PCR检测具有高度敏感性和特异性，可在106～107个正常细胞中检测出1个癌细胞，被认为是目前检测微转移的最有效方法\[1\]。成功的肿瘤微转移的检测取决于是否具有适当的肿瘤标记物。细胞角蛋白20（CK20）由Moll\[2\] 等于1990 年发现，含42 个氨基酸，分子量为48553 ，等电点为566 ，为酸性CK。不同于其他CK ，CK20 具有更为严格的上皮组织特异性，在正常组织中CK20 见于胃黏膜、幽门腺体细胞、十二指肠黏膜、肠黏膜、泌尿系伞状细胞、表皮MerKel 细胞，而其他组织如血液、淋巴、平滑肌、乳腺等均为阴性，且CK20 在细胞发生化生、癌变，肿瘤转移，体外培养等改变时，持续阳性表达\[3，4\]。检测胃癌患者血液中CK20 可作为癌细胞血液播散的标志，有助于判断胃癌患者有无血液转移。 1 资料与方法 1.1 临床资料 收集本院2003 年5月～2004 年5月收治的胃癌患者30 例为实验组，全部病例均经胃镜病理证实；术前检查无其他部位的恶性肿瘤；术前未接受放疗和化疗；全部病例均经手术切除治疗。收集本院同期住院开腹手术的良性疾病患者10 例，作为对照组。实验组男18例，女12例；年龄38～77 岁，平均年龄59.5 岁。 1.2 标本采集 于手术进腹后立即寻找到胃网膜右静脉，予以切开并置入导管至门静脉，抽取各5ml 门静脉血，立即以肝素抗凝存于-70℃低温冰箱中保存，留待检测血CK20mRNA 。所有器械均经0.1% DEPC 液浸泡24h去RNA 酶处理。 1.3 引物 根据GenBank核酸数据库CK20(X73502)：使用Primer Premier 5.0设计两对引物：CK20：目的基因扩增片段长