自体移植法子宫内膜异位症模型大鼠妊娠功能的研究.docVIP

　　自体移植法子宫内膜异位症模型大鼠妊娠功能的研究 【关键词】 子宫内膜异位症/免疫学； 　　　　摘要：【目的】观察自体移植法子宫内膜异位症模型大鼠的妊娠功能，以评价该模型是否能代表人类子宫内膜异位症不孕的病理状态。【方法】取大鼠子宫内膜自体移植复制子宫内膜异位症动物模型，观察模型大鼠的内分泌与免疫功能状态；继而使之与雄性大鼠同笼研究其生殖功能，并与正常大鼠比较。【结果】在免疫功能方面，子宫内膜异位症模型大鼠血中肿瘤坏死因子(TNF)含量升高(与假手术组比较，Ｐ＜001)；在生殖内分泌方面，动情前期模型大鼠血中促黄体生成素(LH)水平降低、催乳素(PRL)水平升高，动情后期的血中孕激素(P)水平降低(与假手术组比，均Ｐ＜001)；且模型大鼠的排卵数、活胎数、着床率等均低于正常大鼠(与假手术组比，Ｐ＜005或Ｐ＜001)。【结论】自体移植法子宫内膜异位症模型大鼠出现生殖功能低下，可作为子宫内膜异位症不孕的模型动物；该模型模拟子宫内膜异位症患者的不孕，可用来进行助孕实验研究及助孕药物研究。 　　关键词：子宫内膜异位症/免疫学；妊娠；疾病模型，动物；不育，女(雌)性/免疫学 　　子宫内膜异位症(EMT)是指有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔面以外的部位而引起的病症，是一种病因不明、多种病理状态、多种临床表现并存的复杂疾病。为攻克这一疑难疾病，人们设计了在体动物实验模型［１］以及单种细胞培养［２］、多种细胞共培养［３］、组织共培养［４］等离体实验模型进行研究。但这些模型各有利弊，均不能完全模拟子宫内膜异位症发生、发展的病理过程，特别是不能完全代表子宫内膜异位症患者腹腔微环境的免疫学、神经内分泌学变化。因此，研究者在根据不同的实验目的来选择模型的同时，仍在不断探索及争议这些造模方法。选用大鼠等实验动物以子宫内膜自体移植法复制子宫内膜异位症模型，由于其模拟了异位病灶侵袭生长的特点，已用于药物抑制病灶生长的研究，但鉴于这一疾病的特殊性、复杂性，单纯病灶的生长与抑制并不能完全说明疾病的发展与痊愈。子宫内膜异位症患者中不孕的发生率可高达80%，其发生机理尤其复杂，以离体的模型进行不孕症的研究，显然不具备说服力，而以自体移植法复制在体动物模型是否可代表患者的不孕状态进行助孕药物研究，尚无人观察。本实验试图研究子宫内膜异位症模型大鼠是否可体现子宫内膜异位症患者所表现的妊娠功能障碍状态，以评价该模型是否可用于子宫内膜异位症不孕的实验研究及助孕药物的研究。 　　1 材料与方法 　　11 实验动物 　　普通级SD大鼠27只，雌性，性成熟，未经交配生育，体重180～220g，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：2000A019；普通级SD大鼠15只，雄性，健康性成熟，体重250～300g，中山医科大学实验动物中心提供，合格证号2000A005。 　　12 检测药盒与仪器 　　促黄体生成素(LH)放免检测药盒、孕激素(P)放免检测药盒、催乳素(PRL)放免检测药盒均由北京北方生物技术所提供；肿瘤坏死因子(TNF)试剂盒由解放军总医院科技开发中心提供；BECKMAN BP5500型γ记数仪。 　　13 造模方法 　　选用健康性成熟、未经交配的雌性SD大鼠，每日进行阴道细胞涂片检查，选择动情周期4～5d者为合格动物，在第3个动情周期的动情期进行手术造模，随机取其中13只行假手术作为对照组，其余均复制子宫内膜异位症模型。 　　131 子宫内膜异位症动物模型造模方法［１］ 　　手术在无菌条件下，以戊巴比妥钠按40mg/kg腹腔注射(ip)麻醉，然后固定大鼠四肢，剖腹，切口长约15cm，切取右侧宫角处的一段子宫，长约1cm，迅速将其置于生理盐水中，将子宫内膜与肌层分离，并剪取两块各约5mm×5mm的内膜组织块，上皮层反向对着体壁，将组织块四角缝固在腹壁上，左右各一。右侧宫角断端吻合结扎。关腹前予以庆大霉素生理盐水溶液冲洗腹腔，最后缝合各层组织，普通级环境饲养。4周后随机抽取造模大鼠4只，再次剖腹观察移植物生长状况，手术成功的标志为：移植物体积增大，出现液体积聚，被结缔组织或大网膜覆盖并有血管形成。同时切取移植物送检，证实移植物中有子宫内膜上皮细胞、腺体及间质的生长，并有分泌活动。 　　132 假手术组造模方法 　　手术条件及麻醉、开腹方法均同EMT模型组，开腹后将右侧子宫角结扎，目的使假手术组与EMT组相同，达到均为单侧宫角子宫的生殖环境。同样以庆大霉素生理盐水冲洗腹腔，逐层缝合各层组织。 　　14 检测指标及方法 　　于动情前期眼球后静脉取血，放射免疫法检测大鼠LH、PRL含量；于动情后期眼球后静脉取血，放射免疫法检测大鼠TNF、P含量；取普通级健康性成熟雄性SD大鼠15只，采血后动物择动情前期以雌雄比例2∶1饲养，每天