2016内蒙古职校乳品分析与检验教案：项目十六 细菌总数的测定.docVIP

项目十六 细菌总数的测定 学习任务： 1.复习微生物的基础知识。? 2.练习玻璃器皿的包扎和灭菌。 3.配制营养琼脂培养基。 4.学习细菌总数的记数。 任务要求： 1.?掌握营养琼脂培养基的配制。 2.?掌握玻璃器皿的包扎和灭菌。 3.?掌握细菌总数测定的方法。 4.?掌握细菌总数的记数。 所需掌握知识点： 菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分培养温度和时间、pH值、需氧性质等）所取1mL（g）检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得的结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中性需氧的菌落总数。生产中主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌对食品被污染程序的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。一、设备和材料冰箱恒温培养箱恒温水浴锅均质器或灭菌乳钵架盘药物天平（0g~500g，精确至0.5g菌落计数器放大镜：4×灭菌吸管（1mL、10?mL）灭菌锥形瓶（500mL）灭菌玻璃珠（直径约5mm）灭菌培养皿灭菌刀剪子镊子灭菌试管(16mm×160mm)二、培养基和试剂营养琼脂培养基磷酸盐缓冲液0.85%灭菌生理盐水75%乙醇三、操作步骤1.?检样稀释及培养1)?以无菌操作，将检样25g(25mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。2)?用1mL灭菌吸管吸取110稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其它稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1100的稀释液。3)?另取1mL灭菌吸管，按上面操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每增加一次，即换用1支1mL灭菌吸管。4)?根据食品卫生许可要求或对标本污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。5)?稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培养基注入平皿内约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时，将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释灭菌培养皿平皿内作空白对照。6)?待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48h±2h。2.?菌落计数的方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下每个平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。3.?菌落计数的报告1)?平板菌落数的选择选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准，一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2代表全皿菌落数，平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落，如有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。2)?稀释度的选择应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告（见表-4-1中例1）。若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视两者之比如何来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字（见表-4-1中例2或例3）。若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应以稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表-4-1中例4）。若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落乘以稀释倍数报告（见表-4-1中例5）。若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告（见表-4-1中例6）。若所有稀释度的平均落菌数均不在30~300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数（见表-4-1中例7）。表-4-1稀释度选择及菌落数报告方式例次 稀释液及菌落数 两稀释液之比 菌落总数（个/g或mL） 报告方式 （个/g或mL） 10-1 10-2 10-3 1 多不可计 164 20 — 16400 16000或1.6×104 2 多不可计 295 46 1.6 37750 38000或3.8×104 3 多不可计 271 60 2.2 27100 27000或2.7×104 4 多不可计 多不可计 313 — 313000 31000或3.1×105 5 27 11 5 — 270 270或2.7×102 6 0 0 0 — ＜1×10 ＜10 7 多不可计 305 12 — 30500 31000或3.1×104 3)?菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时采用二位有效数字，在二位有效数