蛋白质中的夜明珠——绿色萤光蛋白.docVIP

蛋白質中的夜明珠——綠色螢光蛋白 作者：蕭世裕　成功大學生物科技研究所 張貼日期：2009/8/11 各式各樣會發光的生物，造就了自然界多采多姿的有趣模樣，但這些會發光的生物體內究竟隱藏著什麼奧祕呢？在 1962 年下村脩發表的論文中，除了描述水母素的純化分離方法外，也發表另外一個蛋白質的存在。這個蛋白質後來照亮了其他生物的細胞，並廣泛應用於其他不會發光的生物上。 在夏夜裡，閃亮迷人的螢火蟲；在淺灣中，隨潮汐漂流的發光水母；在深海中，頭前帶著照亮著黑暗海世界的燈籠魚。這些各式各樣會發光的生物，造就了自然界多采多姿的有趣模樣，但這些會發光的生物體內究竟隱藏著什麼奧呢？ 生物體發出的螢光，可藉由螢光素和螢光蛋白產生。經由螢光素酶催化後，螢光素變成一種不穩定的化合物，以螢光的方式釋放出能量，螢火蟲、海螢就是利用這種方式發光。螢光蛋白是一種可直接發出螢光的蛋白質，它吸收外來的能量，像是紫外線，就會發出螢光。本文的主角發光水母，便是藉由這方式發光。 2008 年，諾貝爾化學獎頒給日本化學家下村脩（Osamu Shimomura）、美國科學家馬丁?查爾菲（Martin Chalfie）和美籍華裔科學家錢永健（Roger Y. Tsien）3人，表彰他們「發現和應用了綠色螢光蛋白質」。 下村脩 1928 年生於京都，是 3 位得獎人中資歷最老的日籍海洋生物學家。他的科學冒險故事開始於 1950 年代，二次世界大戰結束後的日本。1955 年，求學之路因戰爭而中斷，但仍受名古屋大學平田（Yashimasa Hirata）教授聘為研究助理，要找尋一種海螢磨碎殘骸遇水發光的原理。海螢發光的原理與螢火蟲相同，是由螢光素酶催化螢光素，把它變成一種不穩定的分子，然後放出螢光。 他隨後前往美國新澤西州普林斯頓大學法蘭克?強生（Frank H. Johnson）的實驗室，探討水母發光機制。水母發光的機制與螢火蟲不同，牠具有兩種特殊的蛋白，一是水母素，另一是綠色螢光蛋白（green fluorescent protein, GFP）。首先由水母的螢光素──水母素發出藍光，藍光經由綠色螢光蛋白吸收後，釋出綠色螢光。 1961 年，下村脩在位於北美西岸的福來德港灣的實驗室，開始研究這些出現於實驗室兩側，早晚潮汐成群且一遇到刺激便會發光的維多利亞管水母。水母會發光的器官位於傘狀邊緣，這些是由許多像是小燈泡的顆粒組成的，把這器官切下再用濾紙擠壓，就能獲得水母發光菁華液。下村脩於 1962 年從這些發光菁華液中，分離並且純化出藍色螢光蛋白，稱為水母素。 這個藍色螢光蛋白是在一次偶然的情況下發現的。有一天下村脩正準備離開實驗室，他順手把部分水母發光菁華液倒進水槽裡並關燈，就在關燈的剎那間，回頭一望，看見水槽竟發出閃亮的藍光。這意外的發現，使得下村脩開始研究發光機制。後來才知道發光的原因是因為海水中的鈣離子和水母素結合，再和空氣中的氧氣反應而釋放出藍光。 在 1962 年他們發表的論文中，除了描述水母素的純化分離方法外，也發表另外一個蛋白質的存在，它在陽光下是綠色，在鎢絲燈下呈黃色，在紫外燈下呈強烈綠色。隨後在 1974 年，他們純化出這一個蛋白質，並稱它為綠色蛋白，後人稱為綠色螢光蛋白。 下村脩沒有預料到存在於發光水母中的綠色螢光蛋白，在被他發現的 30 年後，也照亮了其他生物的細胞，並廣泛應用於其他不會發光的生物上。 2008 年諾貝爾化學獎的另外一個得主馬丁?查爾菲（Martin Chalfie）博士，今年 61 歲，美國人，目前任職於美國哥倫比亞大學，是生物學教授兼系主任。主要的研究方向是利用秀麗線蟲做為模式生物，探討神經細胞的發育和功能。這次獲獎的主要貢獻，是把綠色螢光蛋白當作基因標籤，用來觀察各種基因在細胞內或生物體內表現的情形。他發展出的技術已可使綠色螢光蛋白在特定的細胞或組織，甚至整個生物個體中表現。 在 1989 年 4 月 25 日的一個下午，查爾菲博士參加系上舉辦的一場生物體發光研討會中，首次認識了綠色螢光蛋白，並大為驚豔。一般螢光素酶需要其他受質參與作用才能發出螢光，但綠色螢光蛋白只需經由紫外光激發便可以放出螢光。 這時一個瘋狂的想法出現在查爾菲博士的腦海中，「是否能把綠色螢光蛋白的基因與另一個基因的啟動子連結在一起，做為觀察這基因在細胞內表現的情形。」要實現這個想法，首先需要獲得綠色螢光蛋白的基因，互補去氧核醣核酸（complement DNA, cDNA）序列才行。但那時候綠色螢光蛋白的 cDNA 序列尚未被科學家發現，幾經波折後，終於在 1992 年 10 月，得到了綠色螢光蛋白的? cDNA 序列。1 個月後，他成功地在大腸桿菌中表現出綠色螢光蛋白，在顯微鏡下可以看到發出綠色螢光的大腸桿菌。 祖籍中國浙江杭州的錢永健，今年 56 歲，1952