沙利氏血红蛋白计沙利氏血红蛋白计主要有吸血管、比色计和比色管等 .pptVIP

实验四 鱼类血红蛋白含量测定 【目的要求】 掌握鱼类血红蛋白测定的原理和方法。 【基本原理】 测定血红蛋白含量的方法有多种。最常用的是沙利氏比色法。其原理是将少量稀盐酸加入一定量血液，使血红蛋白的亚铁血红素变为高铁血红素，使溶液呈现稳定的棕黄色。用水稀释后与标准色管比较，即可直接读出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。 【动物与器材】 鱼，血红蛋白计（Shali氏）1套，0.1mol／L盐酸（或1％盐酸）、蒸馏水、95％酒精，乙醚、滴管、小玻棒、棉球。 沙利氏血红蛋白计 沙利氏血红蛋白计主要有吸血管、比色计和比色管等部件（下图）。吸血管为一厚壁毛细玻璃管，其上有一20mm3（即20μl）的刻度，尾端膨大，上面套上顶端有孔的橡皮帽或套上胶管，供吸血用。比色计的一侧（或两侧），装有标准色玻璃管，比色管则可插在比色计中。与其一侧（或两侧）的标准色进行比色。比色管的两侧有两行刻度，一行为血红蛋白量的绝对值，表示每100ml血液中所含血红蛋白克数（g%），由2至20为止；另一行为血红蛋白相对值，表示相当正常平均值的百分比（%）。由20起至160止。人用的比色计是以100ml血液中含有血红蛋白14.5g为100％。本实验以绝对值（g/%）来表示为宜。 图1 沙利氏血红蛋白计 【方法与步骤】 1．准备盐酸：用滴管吸取0.1mol/L盐酸，滴5～6滴入刻度比色管内（约加到管下端刻度2处）。 2．采血。鱼类采血方法多种，可采用尾静脉采血法。必要时可从心脏直接采血，但这种方法会使心脏受到损伤而不适宜继续的和多次取血样。 将抽出的血液放入经抗凝剂处理的凹玻片内，用吸血管吸取鱼血至20mm3（即20μl）刻度处（要准确）。将管尖端外面的血液拭去。 3．反应。将吸血管迅速插入刻度比色管底的盐酸中，徐徐滴血于液体底层，并利用上层的盐酸将吸血管洗涤多次（避免起泡），使管内壁血液全部进入溶液中。取出吸血管后，轻轻摇动比色管，使血液与盐酸充分混合，静置10分钟，使管内盐酸和血红蛋白作用完全，形成棕色的高铁血红蛋白。 4．比色。用滴管将蒸馏水逐滴加入比色管中，每加一滴后应摇匀或用小玻棒搅匀，常观察比色管内颜色，直到色度与标准玻璃的色度相同位置（应在自然光下比色）。 5．记录。取出刻度比色管，观察并记录下管内溶液凹面最低处的刻度数字，即为每100ml血液中血红蛋白的克数。 【注意事项】 1 ．采血操作要迅速、准确，不能凝血（必要时可用1%肝素钠或其他抗凝剂处理注射器），也不能有气泡，否则须弃去重采。 2．吸管使用后，必须立即洗涤，并晾干； 3．血红蛋白计的吸血管很容易损坏，应妥加爱护。管内有凝血时不可用金属丝疏通，可浸入1%氨水或45%尿素溶液中（本实验采用的是氨水）； 4．血液与盐酸作用的时间不可过短，必须在10分钟后方可稀释比色，否则血红蛋白不能充分转变成为高铁血红蛋白。 说明： 1 ．血红蛋白含量测定实验用的旧吸血管刻度为20CMM，其含义为20MM3（20CMM，20 cubic mm）吸血时吸至此刻度； 2 ．采血时从鱼的尾部体侧稍微偏向腹侧进针，方向指向脉脊，并刺入脉棘下静脉中； 3 ．沙利氏血色素计的原理：在与标准色相同的情况下，溶液的总体积与血红蛋白的含量成正比。 血细胞记数 稀释200倍 1mm3红血球数=N*10000 （N：5个中方格中红血球总数） 1mm3白血球数=M*500 （M：4个大方格中红血球总数） * *