轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上的适应性.pdfVIP

中国生物制品学杂志2008年 11月第 21卷第 11期 ChinJBiologicalsNovem})er2008，Vo1．21No．11 ·969 · 中国图书分类号 11373．9 文献标识码 A 文章编号 1004-5503{2008)11-0969-03 【基础研究 】 轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞 KMB17上的适应性 张光明 刘馨 张永欣 徐婧雯 洪超 孙茂盛 【摘要 】 目的 探讨轮状病毒P[2]G3株存人二倍体细胞 KMBI7上的适应性。方法 轮状病毒P[2]G3株在猴肾细胞 MA104上经蚀斑筛选纯化后，得到的克隆以不同MOI接种至人二倍体细胞 KMB17上。用微量滴定法与蚀斑法平行检测病毒滴 度，用免疫荧光法检测病毒的增殖情况，最后进行病毒基因组稳定性检测。结果 经MA104细胞培养的轮状病毒P[2]G3株在 人二倍体细胞KMB17上可产生明显的细胞病变(CPE)，但病变出现的时间随病毒传代次数的增加而延迟，抗原性也逐渐减弱。 通过蚀斑筛选纯化得到的克隆病毒，可存KMB17细胞上稳定地增殖。以0．05MOI病毒量接种可产生稳定的CPE，时间为72～ 96h。连续传代至第 l0代，病毒滴度达 105sPFU／rill，病毒基因组稳定。结论 轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞 KMB17上 表现出毒力及增殖能力的衰退；经蚀斑筛选纯化可获得毒力较强的病毒株，并在KMB17细胞中稳定复制、增殖。 【关键词】 轮状病毒；人二倍体细胞 ；蚀斑筛选；适应性 AdaptivityofRotavirusP[2]G3StraininHumanDiploidCellLineKMB17 ZHANGGuang—nfing，LIUXin，ZHANGYong—xin，etal(InstituteofMedicalBiology，ChineseAcademyofMedi— colScience，PekingUnionMedicalCollege，Kunming650118，China) A【bstract】 Objective ToexploretheadaptivityofrotavirusP[2]G3straininhumandiploidcelllineKMB17．Methods TheclonesofrotavirusP[2jG3strainculturedinmonkeykidneyMA104cellswerepurifiedbyplaquescreeningandinoculatedto humandiploidcelllineKMBI7atvariousMOI．Determinethevirustiterbymicrotitrationandplaqueformationtestandtheviurs proliferationbyIFA．andperfomr genomicstabilitytest．Results ObviousCPE wasobservedin KMB17ceilsinoculatedwithro— taviursP[2]G3strainaftercultureinMA104cells．Theantigenieityofvirusdecreasedwiththeincreasingpassage，whiletheappear— aneeofCPEwasdelayed．ThepurifiedP[2]G3strainwasproliferatedstablyinKMB17cells．StableCPEwasobservedinthe KMBI7cells72．96hafterinoculationwithP[2]G3strainatMOIof0．05．TheP[2]G3strainaftersubcultureinKMB17cells f0r10passagesreachedaliterof10 PFU ／mland showedgoodgenomicstability．Conclusion Bothviurlenceandproliferation levelofrotaviursP[2]G3strainculturedinMA104cellsdecreasedaftersubcultureinKMB17cells．ViurlentP[2jG3strainwaspu— rifled byplaquescreening，andreplicatedandproliferatedstablyinKMB17 (：ells． 【Keywords】Rotav