糖类的高效毛细管电泳分析论文.pdfVIP

第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集 2007．07．15-18威海 糖类的高效毛细管电泳分析 付杰1，郭学平2，王凤山1 1． 2；2．山东省生物药物研究院博 山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，山东济南25001 士后工作站实验室，山东济南250014 从结构上来说，单糖是多羟基的醛或酮，是组成糖类及其衍生物的基奉结构单元。 单糖之间缩聚可以形成寡糖或多糖，还可以与非糖物质结合形成糖苷。在自然界中，动 物、植物、微生物都含多糖，它除了以游离状态存在外，也可以与蛋白质结合形成糖蛋 白。糖类化合物一直是分析化学界公认的难分离的一类物质。 毛细管电泳虽然是一种高效的分离分析手段，但在糖类的分析上也存在着一些难 点，主要因为多数糖类解离程度十分微弱，且具有较强的亲水性，致使利用样品淌度差 异的毛细管区带电泳和利用样品疏水性差异的胶束毛细管电动色谱都难以直接解决糖 的分离问题。其次，多数糖类不具备很强的紫外和荧光生色团，使分离后的检测有一定 困难。面对这些技术难题，人们利用高效毛细管电泳(HPCE)的特点，开展了一些研究， 现介绍如下。 1柱前衍生 汲晨锋等人报道将香菇多糖的单糖经Q一萘胺衍生化以后，用硼砂做电泳介质进行 HPCE分离，得到了标准的Q一萘胺衍生单糖的毛细管区带电泳谱图。将香菇多糖水解成 单糖，用相同的方法实施电泳，得到多糖的毛细管区带电泳谱图。通过与标准谱图对照 分析，得知香菇多糖由鼠李糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖组成。 聚物用AMAC衍生后，加入NHA结合蛋白溶液中考查它们的相互作用，取得了良好的效果。 常用的衍生剂。 2荧光检测 荧光检测的灵敏度通常比紫外检测的高，想办法利用荧光对糖类化合物进行检测也 是糖分析工作者考虑的一个方向。熊少祥等利用毛细管一激光诱导荧光一增强型电荷耦合 器件系统，高灵敏度地检测了痕量的氨基糖。 3胶束电动毛细管色谱 胶束电动毛细管色谱是在电泳缓冲液中加入离子型表面活性剂(如十二烷基硫酸 钠， SDS)，当溶液中表面活性剂浓度超过临界胶束浓度时表面活性剂分子之间的疏水 基团聚集在一起形成胶束假固定相，通过分离对象在胶束相和水相之间的分配系数不同 而实现分离。虽然SDS胶束带负电，但一般情况下，电渗速度仍大于胶束的电泳速度， 故胶束仍以较低的速度向负极移动。 ’ 胶束电动毛细管色谱不仅能分析离子化合物，还能分析不带电荷的中性化合物，把 电泳分离的对象从离子化合物扩展到中性化合物，从而拓宽了毛细管电泳的应用范围。 此外，胶束电动毛细管色谱还能很快且很容易地通过改变流动相和胶束相的组成来增加 分离选择性。Maccari等人用胶束电动毛细管色谱测定S 透明质酸，取得较好效果，比强型阴离子交换高效液相色谱法(SXA—HPLC)灵敏度高了 20倍。