脐带MSCs对RA患者PBMC中ROR-γt及IL-17表达的影响论文.pdfVIP

脐带MSCs对RA患者PBMC中ROR-γt及IL-17表达的影响论文.pdf

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山东医药2013年第 53卷第7期 脐带 MSCs对 RA患者 PBMC中ROR.7t 及 IL一17表达的影响 许平娟 ,王 秦 ,闰 欣 (1上海市奉贤区中心医院,上海201414;2山西医科大学第一医院) 摘要:目的 探讨脐带MSCs体外培养对RA患者Thl7细胞调节机制的影响。方法 收集 18例RA患者(RA 组)及6例健康志愿者(对照组)清晨空腹静止状态的静脉血,提取外周血单个核细胞(PBMA),分别按 1:1、1:10、1 :50比例与脐带MSCs混合培养 ,设单独PBMC培养者为对照。采用RT.PCR、West.bloting法检测PBMC中Thl7相 关转录因子(ROR一7t)mRNA及蛋白表达,采用流式细胞仪检测 IL—l7水平。结果 与PBMC单独培养者比较,RA 组混合培养后ROR,t/mRNA和蛋白水平均显著下降,尤其是在病情高度活动者,此种抑制效应呈剂量依赖性;RA 组病情缓解者和对照组IL一17水平无显著变化,但 RA组疾病活动者IL一17水平显著上升,且病情高度活动者的抑 制效应呈剂量依赖性。结论 脐带MSCs体外培养能影响RA患者的Th17细胞调节机制,此为临床RA的免疫调 节治疗提供了依据。 关键词:脐带间充质干细胞 ;外周血单个核细胞 ;Thl7细胞 ;调节机制 cloi:10.3969/j.issn.1002-266X.2013.07.015 中图分类号:R593.22 文献标志码:A 文章编号:1002—266X(2013)07-0043.-04 美国风湿病学会近年的一项流行病学调查表 例体检中心健康志愿者(对照组)清晨空腹静止状 明,类风湿关节炎(RA)已成为常见的全身性 自身免 态抽取的静脉血 15mL,留存于肝素抗凝管,所有标 疫性疾病,慢作用药物的应用使患者的致残率近年 本于采集后1h内进行相关实验。其中RA组男、女 有所下降,但临床缓解率仅能达到40%~57%,且 各9例,年龄23~67(38.13±12.15)岁,均符合 毒副作用较为严重…。脐带间充质干细胞 (MSCs) 1987年ACR修订的RA诊断标准,并除外其他慢性 体 内移植治疗 自身免疫性疾病成为近年研究的热 疾患,其中疾病活动指数 (DAS)285.1者6例、3. 点,动物模型显示其能明显改善肾小球肾炎及系统 2DAS≤5.1者6例、DAs28≤3.2者6例;对照组 性红斑狼疮等疾病的症状、有效治疗和预防移植物 男2例、女4例,年龄24~56(46.13±11.25)岁。 抗宿主病 (GVHD) J,其机制可能是通过某种方 两组一般资料具有可比性。 式导致了T细胞的不反应l6,。本研究观察了脐带 1.2 脐带 MSCs的分离培养及外周血单个核细胞 MSCs体外培养对 Thl7细胞调节机制的影响,以期 (PBMC)的分离 ①脐带MSCs的分离培养:通过贴 为RA的免疫治疗提供依据。 壁培养法分离、提纯 MSCs(表型 CD 阴性,CD 、 1 材料与方法 CD 、CD凹阳性,CD 弱阳性),取第 3代生长达 1.1 材料 无菌条件下留取的足月顺产新生儿脐 80%融合的贴壁 MSCs细胞 ,用0.25%胰蛋白酶消 带(由山西医科大学第一医院妇产科提供,均征得 化,胎牛血清终止反应,吸管吹打,1500rpm/min离 新生儿父母同意),用PBS反复冲洗,并仔细剔除脐 心5min后去上清 ,加入无血清培养液稀释进行计 带内血管,只留下华顿胶样组织。低糖DMEM培养 数,并调整细胞浓度为2×10/mL,离心后弃去无血 液,Percol1分离液,Phannacia公司胎牛血清,杭州四 清培养液,用稀释液按倍数稀释细胞备用。(~)PBMC 季青公司HumanThl7细胞因子,CBA分析试剂盒 的分离:将HankS液与肝素钠抗凝静脉血等体积混

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