自制微流控芯片SDD无胶筛分电泳免疫抗体片段分析论文.pdfVIP

微流控芯片实验室进展 自制微流控芯片SDS无胶筛分电泳免疫抗体片段 黄淮青毛秀丽戴忠鹏秦建华宰林炳承。 中国科学院大连化学物理研究所 1引言 免疫抗体所具有的特异性使得其在临床免疫分析领域得到广泛应用。抗体分子的基本结 构为对称的四条多肽链，即两条相同的轻链(L链)和两条相同的重链(H链)，借链间二硫 键连结成“Y”字型单体分子。传统的分析抗体的方法多采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，但这种 方法样品上样量大，染色费时，且操作过程繁琐。近年来，多个研究小组采用SDS．CGE方 法(SDS一毛细管凝胶电泳)来分析抗体，但还是存在分析时间长，上样量大等缺点。微流 控芯片是近年发展起来的一种新的分离分析技术，可以实现样品的进样、反应、分离和检测 一体化，并且具有高通量、快速、高效和低耗的优点。 作者采用微流控芯片为平台，免疫球蛋白作为模型，优化了微流控芯片SDS无胶筛分 电泳条件，在自制玻璃微流控芯片上实现了免疫抗体在还原和非还原处理条件下r哑基的分子 量及其分布的测定，其结果与实际报道相符。微流控芯片SDS无胶筛分电泳作为一个新的 分离分析技术，在免疫抗体性质研究方面存在着很大的潜力。 2实验部分(略) 3结果与讨论 3．1微流控芯片SDS无胶筛分电泳蛋白质分离条件的优化 在不同浓度葡聚糖筛分介质条件下的蛋白质SDS无胶筛分微流控芯片电泳谱图见图 la，随着筛分介质葡聚糖浓度的增加分离时间也增加，在葡聚糖浓度为12％(w／v)条件下， 峰3，4，5对应的三个蛋白的分离效率很低，这可能是受样品中残留的染料影响，而在10％ 和8％(w／v)葡聚糖浓度条件下，蛋白质标样都得到很好的分离，而10％(w／v)葡聚糖浓度 的条件对于大分子量蛋白的分离效率要高于8％(w／v)，因此以下的实验采用10％(w／v)葡聚 糖作为筛分介质。随着运行缓冲液TBE(Tris．硼酸)浓度的增加，分离度也逐渐降低(见图lb)， TBE作 这是因为运行缓冲液浓度过大，电流增大，焦耳热增加，柱效降低，因此选定0．2M 为分离缓冲液。 迁移时同(摹) 迁移时阃‘。) (a) (b) 图1蛋白质在不同分离缓冲液条件下的电泳谱图。(a)TBE浓度为0．211，葡聚糖浓度(w／v)分别为蹦，10％，12％(b，。 葡聚糖浓度为10％(w／v)。TBE浓度分另U为0．111，0．211，0．4tl。图中所标示的峰为：1．染料2．溶菌酶，3．碳酸酐酶4． 鸡卵白蛋白5．人血清白蛋白6．伴清白蛋白7．磷酸化酶B。 在优化的实验条件下，重复六次的迁移时间平均值对LoG分子量作图，得到很好的线 性(R2大于99％)(见图2)。 ‘通讯联系人：林炳承鲢!i!塑i!n：墼：业秦建华j曲i!鲤igQ：!!：凹 基金项目：国家自然科学基金项目，国家自然科学基金项目 芯片应用 3．2免疫球蛋白还原和非还原条件下的分离 免疫球蛋白经过加热处理，L链和H 2 链之间的二硫键发生断裂，可能存在多 种不同的片段。对免疫球蛋白在不同处 5 理条件下的产物进行微流控芯片SDS无 48 胶筛分电泳，所得结果见图4。采用还原 硭冬嫒面随v 条件处理，免疫球蛋白(Ab)大部分为L 46 链和H链，而在非还原条件下(样品缓 L圆Crl 44 冲液中无D11．)，免疫球蛋白的二硫键没 有被完全打开，还存 42 在不同片段或者不同抗体之间的相互连 150 170