广州医科大学《临床免疫学检验》4.凝集反应.pptVIP

凝集反应的概念 颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)或覆盖了可溶性抗原（或抗体）的载体颗粒与相应抗体（或抗原）结合后，在适当电解质存在下，出现的肉眼可见的凝集现象。 1896年 Widal反应诊断伤寒病 1900年Landsteriner在血凝现象的基础上发现人类ABO血型系统,并于1930年获得诺贝尔奖 凝集原(agglutinogen)：凝集反应中的抗原 凝集素(agglutinin)： 凝集反应的抗体 凝集反应的特点 定性或半定量试验 根据凝集现象的出现与否定性判断抗原抗体是否对应；将血清标本倍比稀释后再进行反应，以出现凝集反应的最高稀释度作为抗体的滴度（效价）。 反应阶段： 抗原抗体的特异性结合 出现肉眼可见的凝集现象 凝集反应的类型 直接凝集反应 间接凝集反应 （正向）间接凝集反应 反向间接凝集反应 间接凝集抑制反应 协同凝集反应 抗球蛋白试验 直接凝集反应 Direct agglutination reaction 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。 分为玻片凝集反应和试管凝集反应 玻片凝集试验 在玻片上颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。常用于菌种鉴定、血清学分型、血型鉴定等。 试管凝集试验 在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。 多用于测定抗体效价 方法评价：特异性易受影响、敏感性不高 临床意义： Weil-Felix reaction、Widalreaction、交叉配血试验 在临床上主要用已知的伤寒沙门菌O或H抗原检测血 清中有无相应的特异性抗体及其效价，以协助诊断 伤寒病或供流行病学调查。 临床上开展的外斐反应是利用与立克次体有共 同耐热性多糖抗原的变形杆菌OX19、OX2、OXk菌株 代替立克次体作为已知抗原，与患者血清进行凝集 试验，以辅助诊断斑疹伤寒、恙虫病等立克次体疾 病。 现给你OX19、OX2、OXk三种诊断菌液和待测血 清，请写出利用试管凝集法进行的外斐试验的操作 步骤。 间接凝集反应 将可溶性抗原(或抗体）先吸附或偶联于颗粒性载体表面上，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质的参与下，出现的特异性凝集现象。 载体(carrier)：试验体系中与免疫无关的颗粒。 致敏颗粒（sensitized particle):吸附有已知抗原或抗体的颗粒。 载体种类及其处理方法 红细胞（人O型红细胞、绵羊红细胞） 新鲜红细胞吸附蛋白能力弱，易污染和溶血，不易保存 醛化红细胞吸附蛋白能力强，不易溶血，-20oC保存一年 聚苯乙烯胶乳颗粒 人工合成的载体，大小均一、直径0.8μm的圆形颗粒 明胶颗粒 间接血凝试验 以红细胞为载体的间接凝集试验 ： 敏感性较强、简便、快速、成本低廉 胶乳凝集试验 以聚苯乙烯胶乳为载体的间接凝集试验 胶乳颗粒的性能比RBC稳定、均一性好 与抗原结合的能力及凝集性能不如RBC 明胶凝集试验 将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集。 间接凝集反应的应用 抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。 抗体的检测 检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。 抗球蛋白试验 抗球蛋白试验 又称 Coombs试验 冷凝集试验 * * 凝集反应  Agglutination test 广州医科大学金域检验学院 徐霞 可见反应形成 + 方法评价:定性试验、简便快速、敏感度低 正向间接凝集试验 载体 可溶性抗原 致敏 致敏颗粒 NS 凝集颗粒 待测抗体 抗原致敏载体------检测抗体 反向间接凝集试验 ＋ 载体 已知抗体 致敏 致敏颗粒 NS 凝集颗粒 待测抗原 抗体致敏载体-检测抗原 间接凝集抑制试验 待测尿液(含HCG) 抗HCG 特异结合 抗原抗体复合物 NS ＋ 致敏颗粒 用抗原致敏载体及相应抗体作为诊断试剂，用于检测标本中是否存在与致敏载体相同的抗原 无凝集颗粒为阳性 以检测尿HCG(妊娠试验)为例 间接凝集抑制试验 待测尿液(无HCG) 抗HCG 无结合 NS ＋ 致敏颗粒 有凝集颗粒为阴性 载体:金黄色葡萄球菌 金葡菌细胞壁中含有蛋白A(SPA),SPA具有能与IgG Fc结合的特性, 利用该特性可将其与IgG抗体相连,使其成为抗体致敏的载体颗粒. 协同凝集试验 SPA与血清中的IgG类抗体的Fc段非特异