抗小麦黄花叶病毒转基因小麦的分析.pdfVIP

摘 要 RNAl、RNA2 利用WYMV cDNA克隆，扩增出外壳蛋白基因和可能与真 白基因或72kDa蛋白基因的两个植物表达载体。外壳蛋白基因与位于同一载体 上的除草剂基因，72kDa蛋白基因与位于其他载体上的外源基因(包括选择压力 基因NPTII基因)通过基因枪法对小麦幼胚进行转化。在转化体系建立与优化 的过程中，对分化阶段激素的使用、轰击用微弹的制备、蔗糖在转化体系中的 应用、多质粒共同转化的共整合频率等进行了探讨。其中，高渗培养阶段用o．4M 的蔗糖(相当于12％)代替同摩尔浓度的甘露醇、恢复培养阶段采用6％蔗糖 溶液。该方法方便有效，可以提高分化率和转化效奎(本实验中转化效率达到 2 小麦黄花叶病重病田，进行田间抗病性检测。结果表明：其中一个转外壳蛋白 Blot和RT-PCR 基因株系的T2代植株群体在田间对该病呈现高度抗性。Western 俭测表明，该抗性株系中的外壳蛋白含量明显低于感病株系，初步认为其抗性 是由病毒诱导的基因沉默引起的。种植在病田的T3代植株群体依然表现较强的 抗性。 ， ／‘ j 。． 关键词：转基因，．隧基因括幼胚小麦昔香花叶病毒抗病 Abstract Coat and72kDa were fromtheeDNA gene amplified gene protein protein clones mosaic andRNA2．Thewere virus(WVMV)RNAlgenes ofwheatyellow inserted intothe vector coat pActl．cas．Theprotein respectivelyplantexpression witll withbar whichisinthesame the72kDa the gene gene vector,or proteingene other theselective isindifferent gene，which vector, including gene，NPTII genes immatureofwheatcultivarsvia bombardment weredeliveredinto embryos particle Establishmentand ofthetransformationinvolved of optimization system application hormone shootinduction ofbombardment during period，preparation golden ofsucroseandCO