促排卵治疗后子宫内膜降钙素mRNA表达水平的分析.pdfVIP

· 432 · JournalofQiqiharUniversityo{Medicine，2012。Vo1．33．No．4 促排卵治疗后子宫内膜降钙素mRNA表达水平的分析 魏 伟 王 芳 【摘要】 目的 了解多囊卵巢综合征 患者经过促排卵治疗妊娠率较低 的原 因，探讨其有关子宫 内 膜的分子学改变。方法 采用逆转录一联合酶链反应 (RT—PCR)技术检测多囊卵巢综合征患者 66例 (研究组)促排卵后子宫内膜 中的降钙素mRNA表达水平 ，研究组分别进行不同的促排卵治疗方案(研 究组 A、研究组 B)，另选择因输卵管与男性不育因素的女性不孕患为对照组，比较 降钙素 mRNA表达 水平的差异。结果 对 照组 、研 究组 A、研 究组 B 的子 宫 内膜 降钙素 mRNA 的半定量分析结果 ： (O．89±0．08)、(0．79±0．08)、(0．82士0．07)。研 究组 A、研究组 B显著低 于对照组 (P均d0．05)，研 究 组 A、研究组 B比较无显著性差异 (P 0．05)。结论 促排卵治疗可使着床期子宫内膜 降钙素mRNA 的表达水平下降，从而导致低 临床妊娠率 。 【关键词】 降钙素 促排卵 子宫内膜 多囊卵巢综合征 逆转录一联合酶链反应(RT—PCR) 近年来女性不孕症的发病率有逐年升高的趋势，排卵障 1．3 研 究方 法 碍性不孕 占其病例的4O 左右 ，而排卵障碍性不孕的主要诱 1．3．I 标本采集 排卵后第 6天采用消毒刮匙刮取子宫前 因为多囊卵巢综合征 ]。临床中常用氯米芬等促排卵药物治 壁 的内膜组织，置 EP管中，放人一7O℃低温冰箱保存 。在子 疗排卵障碍 ，可有效提高排卵率至 50 ～7O ，但促排卵治 宫内膜 日抽取静脉血 ，采用 电化学发光免疫法检验孕酮与雌 疗无法获得较高的妊娠率 ，一般妊娠率只有 2O ～3O ，而 二醇水平 。 此问题 目前尚无法得到有效解决[2]。为了了解多囊卵巢综合 1．3．2 提取子宫内膜组织 RNA 先用 RNA裂解液进行组 征患者经过促排卵治疗妊娠率较低的原因，探讨其有关子宫 织裂解 ，吸附，加入 500td去蛋 白液并离心，加人 500 1洗涤 内膜的分子学改变，本文采用逆转录一联合酶链反应 (RT— 液 ，静置 1min后离心 15s。反复洗涤离心后 ，加入 5o“l纯 PCR)技术检测多囊卵巢综合征患者促排卵后子宫内膜 中的 水，室温静置 1min后离心 1rain，置离心管 (RNA)于冰上 。 降钙素 mRNA表达水平 ，现报道如下。 1．3．3 扩增 目的基因 PCR引物采用 Primer5．0软件包设 1 对象和方法 计 ，将 3一磷酸甘油醛脱氢酶 (GAPDH)作为内参照。逆转录 和PCR的扩增采用单管法一步进行 ，所用仪器为 Eppendorf 1．1 一般 资料 随机选择 2010年 1月～2011年 12月菏泽 PCR扩增仪。RT—PCR相应 的反应条件设置 ：逆转录 48℃ 市牡丹人 民医院妇科就诊的66例多囊卵巢综合征患者为研 45min，接着立即进行 PCR扩增 ，起始变性 95℃ 2rain，再灭 究组，年龄 22～39岁，平均年龄 (27．56±2．77)岁，原发或继 活反转录酶，变性 94℃ 1rain，复性 48。C 1rain，延伸 72。C 发不孕 2～11年 。所有患者均符合多囊卵巢综合征诊断标 1min，PCR扩增共进行 3O个循环，终末延伸 75℃ 10min。 准0]，基础体温单相 ，闭经或月经稀发，输卵管通畅，无优势卵 1．3．4 降钙素 mRNA水平 的测定 RT—PCR结束后 ，