高效液相色谱法2.pptVIP

* b. 光电二极管阵列检测器 photodiode array detector; PDAD 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 * 光电二极管阵列检测器 * 工作原理 化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的荧光；荧光强度（F）与激发光强度（I0）及荧光物质浓度（c）之间的关系为 Q：量子产率 K：荧光收集效率 ε:摩尔吸光系数 l：光径长度 (2) 荧光检测器 fluorophotometric detector；FD * 特点： 灵敏度高（高于紫外检测器） 只适用于能产生荧光或其衍生物能发荧光的物质。 是体内药物分析常用的检测器之一 * (3) 安培检测器 amperometric detector 工作原理 在电极间施加一恒定电位，当电活性组分经过电极表面时，发生氧化还原反应，产生电量（Q）的大小符合法拉第定律：Q=nFN。因此反应的电流（I）为 n：每摩尔物质在氧化还原过程中转移的电子数 F：法拉第常数 N：物质的摩尔数 t：时间 * (4) 蒸发光散色检测器 evaporative light scattering detector; ELSD 流动相 （样品） 加热 流动相蒸发除去 组分形成气溶胶 强光 测定散射光强 I = k mb * 特点： 通用型：如糖类、氨基酸等分析 适用于挥发性低于流动相的组分 灵敏度低 流动相必须是挥发的，不能含有缓冲盐 * 组分 + 发光试剂 ? 激发态产物 光辐射 基态 特点： 灵敏度高 选择性高 不需光源 (5) 化学发光检测器 * 四、高效液相色谱分析方法 * 色谱鉴定法 化学鉴定法 两谱联用鉴定法 (1) 定性方法 色谱系统适用性内容：塔板数、分离度、拖尾因子和重复性 * 外标法 内标法 (2) 定量方法 * 例1. 用15cm长的ODS柱分离两个组分。柱效n = 2.84?104m-1；测得t0 = 1.31min；组分的tR1 = 4.10min；tR2= 4.45min。（1）求k1、k2、?、R值。（2）若增加柱长至30cm，分离度R可否达1.5? * （2）L2 = 30cm: * 仪器分析 第18章 高效液相色谱法 High performance liquid chromatography; HPLC (2) * 高效液相色谱法的主要类型和原理 高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择 高效液相色谱仪 高效液相色谱分析方法 Introduction * 对流动相的要求： 不与固定相发生化学反应。 对样品有适宜的溶解度。 必须与检测器相适宜。 粘度小 2. 化学键合相色谱法的流动相 * n1/2 ?-1 k2 R = —— (——) (——) 4 ? 1+k2 n：由固定相及色谱柱填充质量决定 ? ：主要受溶剂种类的影响 k ：主要受溶剂配比的影响 (1) 溶剂系统对分离度的影响 * (2) 溶剂的强度和选择性 a. 溶剂的极性和强度 正相分配色谱：流动相极性小于固定相极性，极性小的先流出，适于极性组分分离。 反相分配色谱：流动相极性大于固定相极性，极性大的先流出，适于非极性组分分离。 * 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性：ABC 正、反相色谱中极性和保留时间的关系 * b. 选择流动相时应注意的几个问题 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失； （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 * GC：填充柱： H = A + B/u + Cu 毛细管柱：H = B/u + Cu HPLC： H = A + Cu 3. 分离条件的选择 (1) HPLC中的速率理论 * A = 2? dp A减小的措施： 降低dp： 3~5?m 降低? ： 球形、仄粒度分布固定相 高压、匀浆装柱 a. 涡流扩散 (e