血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究.pdfVIP

第 25卷 第 5期 实验动物科学 Vo1．25 No．5 2008年 l0月 LAB0RAT0RY ANIMALSCIENCE October20o8 驴 舻 驴 抄 技术 ·方法 、扩 驴 、沪 、 、沪 血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究 王 吉 卫 礼 肖 镜 马丽颖 邢瑞昌 贺争鸣 (中国药品生物制品检定所国家实验动物微生物、遗传检测中心，北京 100050) 摘要 ：目的 建立一种简便、易行的方法 ，对酶联免疫吸附试验的结果进行质量控制 。方法 依据 国标 ELISA方法 对578份小鼠血清进行 11种病毒抗体检测 ，共检测抗体 3677份。对初步检测出的242份抗体阳性血清，经 56％ 30min水浴灭活处理后进行复检。结果 可疑阳性血清经灭活处理后复检，正常抗原孔A值和特异抗原孔A值明 显低于初检的正常、特异抗原孑LA值，差异显著(P0．05)；初检和复检的特异抗原孔A值与正常抗原孔A值的比 值有显著性差异(P0．05)；血清灭活前后阳性率有显著性差异(P0．01)，分别为 6．58％和 2．86％。阳性对照灭 活前后A值无显著差异 (P0．05)。结论 血清经灭活处理后，使检测结果的假阳性率显著降低。 关键词 ：灭活；酶联免疫吸附试验 ；血清 中图分类号 ：R．331 文献标识码 ：A 文章编号 ：1006—6179(2008)05—0059—03 酶联免疫吸附检测方法具有微量、特异、高效、 会影响结果的测定 ；存放过久的样本 ，血清中 IgG可 经济 、方便、安全和结果客观等特点，广泛应用于生 聚合成多聚体，AFP可形成二聚体，导致本底过深， 物学和医学的许多领域 ，在理论研究和实际工作 中 造成弱的假阳性 。 都发挥了重要作用。但在工作 中遇到的最大问题是 为减少假阳性结果的出现，我们根据检测工作 出现假阳性 ，其大多数是 由于弱阳性反应引起 的，因 的实际情况，针对易产生影响因素的血清样本采取 而给检测工作带来麻烦 ，甚至引起纠纷…。 了灭活处理 ，并对灭活血清和未灭活血清进行了对 假阳性结果产生的原因与动物机体、操作、仪 比研究 。 器、方法学本身、样本等多方面因素有关，其 中样本 (血清样品)因素在检测工作 中 占有 的位置举足轻 1 材料和方法 重。如样本处理不完全 ，血液抽取后未完全凝 固即 离心分离血清 ，纤维蛋 白未完全析出，容易在板孔 中 1．1 材料 形成纤维蛋 白薄膜或絮状物 ，造成洗板时清洗不干 小 鼠及小 鼠血清：2007年 1～8月来 自国内 15 净，酶残留在相应的板孔 中，使吸光度值偏高，造成 个单位送检共 578只，份 ；山羊抗小鼠IgG．HRP：来 自 假的阳性结果 ；其次样本溶血时细胞 内液的各种活 澳大利亚啮齿类实验动物病毒检测中心；小鼠11种 性酶及具有酶样活性物质可与底物非特异性结合 ， 病毒抗原及阴、阳对照血清 由本室制备冻存 。 血红蛋 白具有类过氧化物酶的活性 ，其效应与辣根 1．2 主要仪器 过氧化物酶类似 ，溶血后反应孔非特异性吸附 Hb， 酶标仪 ：ThermoMULTISKANMK3；37℃水浴箱 ： 洗涤时不易洗去 ，催化底物产生一定程度的显色 ，使 上海森信实验仪器有限公司DK一4500B型；37~C培养 本底吸光度值升高而造成假阳性 ；再者 ，样本采集 箱 ：WGP．600。 后及分离血清时应避免细菌污染 ，因一些细菌体 内 1．3 方法 可能含有 内源性辣根过氧化物酶，会对用相应酶作 按国标 GB／T14926．50．2001、GB／T14926．18～20— 标