高产MonacolinK菌株的筛选及鉴定.pdfVIP

方法，对该菌株进行初步鉴定。对照 《真菌鉴定手册》，确定该菌株属于真茵门(Eumycopf川n)、子囊菌 纲(Asomycetes)、真子囊茵亚纲(Eurotiaceae)、曲霉 目(Eurrotiales)、曲霉科 (Eurotiaceae)、红 曲霉属 (Monascus)，暂定编号为M一3。 关键词：红 曲霉 ；MonacolinK；筛选；鉴定 日本学者 远藤章 1976年 从桔 青霉 (Penicillium 1材料与方法 citrinum)代谢产物中发现可抑制 HMG—CoA还原酶的活 性物质 ．其通过可逆 、竞争性地与 HMG—CoA还原酶结 1．1材料 合 ．来抑制该酶的活性 ，达到抑制机体内胆固醇合成的 目 1．1．1菌株 的。之后远藤章又从红色红曲霉 (Monascusruber)发酵液 系从市售红曲米、名优腐乳产品、乌衣红曲中分离到 中分离 出高活性 的HMG—CoA还原酶抑制剂 Monacolin 的32株红 曲菌株 。 K 。 目前 MonacolinK(莫那可林)是临床常用 的降脂药 1．1．2试 剂 物 之一 。可 以合 成 MonacolinK 的真菌 有 曲霉 属 MonacolinK标样 ，购 自美国Merck公司。桔霉素 (Aspergillusspp．)、红 曲霉属 (Monascusspp．)、诺卡菌属 (citrinin)标准品，购 自sigma公司。 (Nocardiaspp．)、拟无枝菌 (Amycolatopsisspp．)、毛霉属 其它试剂均为国产分析纯 (Mucorspp．)和青霉属 (Penicilliumspp．)，而用于工业化 1-1_3培养基 生产 MonacolinK的主要有土 曲霉菌和红曲霉菌两种 PDA培养基 ：土豆汁 20％，葡萄糖2％，琼脂2％。 本文从国内含红曲霉的红曲米 、名优腐乳产品、乌衣红曲 小米培养基 ：小米 25g，水 30mL，装入 1000mL锥 等产品中筛选高产MonacolinK的菌株，并对其进行鉴 形瓶 ，121oC灭菌 60min。 定 大米培养基 ：大米浸泡 24h后沥干 ，121℃灭菌 60 min，装量为 1000mL锥形瓶 30g。 … … J．ANG U SH N YU FA I S lPl JIAO 斓 1．1．4主要仪器 168泵系统高效液相色谱 ，Backman公司。 1．2方法 1．2．1红曲霉菌的分离 分别取经研磨后的红曲米、名优腐乳产品或乌衣红 曲粉样品 1g，加 10mL无菌水充分混匀后静置取其上 清液按不 同稀释度稀释后涂布于 PDA平板上 ，于 32℃ 培养 3～5d，挑选具有红曲霉菌基本特征的单菌落，转至 PDA斜面同样条件下进行培养 。经多次纯化后获得 32 株红曲霉菌株用于筛选 。 1．2．2红 曲霉菌的筛选 1．2．2．1小米孢子的制备 将活化后的32株待测菌株接至经灭菌的小米培养 基中，32qc。相对湿度 60％～70％培养 7～11d，培养过程 中适当补无菌水 ，并每天振瓶 1～2次。培养好 的小米孢子 置于 4℃冰箱 中保存 。 菌株 №? K 譬力 tu 1．2．2．2红曲霉菌筛选 m gJ ,