- 1、本文档共26页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
测序模板的要求 - 中国实验动物信息网
测序知识概述 Invitrogen Proprietary Confidential * Content 普通测序及测序相关基础知识 普通测序生产流程介绍 困难模板测序相关知识 困难模板测序生产流程介绍 测序简单问题解答 Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——基本概念 什么是DNA以及DNA测序 又称脱氧核糖核酸,是染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。 ????DNA分子极为庞大(分子量一般至少在百万以上),主要组成成分是腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸(简称A、T、C、G)。DNA存在于细胞核、线粒体、叶绿体中,也可以以游离状态存在于某些细胞的细胞质中。大多数已知噬菌体、部分动物病毒和少数植物病毒中也含有DNA。????除了RNA(核糖核酸)和噬菌体外,DNA是所有生物的遗传物质基础。生物体亲子之间的相似性和继承性即所谓遗传信息,都贮存在DNA分子中。?? Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——基本概念 DNA的结构 DNA共有四级结构 一级结构:由多个4种脱氧核苷酸分子通过3’,5’—磷酸二酯键连接形成的直线型或环型多聚体。 二级结构:在碱基互补配对的基础上形成的DNA双螺旋结构。 三级结构:在二级结构上,DNA双螺旋结构通过折叠和扭曲所形成的特定构象。如超螺旋等。 四级结构:指DNA与蛋白质形成的复合物。如染色体(质)。 ——DNA测序就是测定DNA的一级结构 Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——基本概念 DNA结构示意图——单核苷酸及DNA的二级结构——4种脱氧核苷酸分子通过3’,5’—磷酸二酯键连接形成的直线型或环型多聚体。 Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——基本概念 DNA结构示意图——DNA的三级结构:双螺旋DNA进一步扭曲盘绕则形成其三级结构,超螺旋是DNA三级结构的主要形式。 。 Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——基本概念 DNA结构示意图——DNA的四级结构: DNA与蛋白质形成的复合物。如染色体(质)。 Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——基本概念 DNA测序原理 目前DNA测序的原理是Sanger双脱氧链末端终止法,简单来说,就是单引物扩增的PCR反应,但是将PCR反应体系中的dNTP换成了带有荧光标记的ddNTP和dNTP的混合物。 目前最普遍的DNA测序技术是采用四色荧光分别标记四种ddNTP. 一个样品的测序反应只需在同一反应体系中同时加入四种ddNTP. 产物无须分离即可在一个泳道中电泳. 序列的读取依靠检测器对不同荧光的区分.并需要通过软件系统的分析. 动画演示:/video/2005/43.htm 目前测序需要使用的仪器 A.PCR扩增仪 B.3730XL全自动荧光测序仪 Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——测序模板的要求 测序分析软件 A. Sequencing Analysis 5.2,用于将测序原始数据转换为峰图文件 B.DNAStar,用于将测序得到的结果进行拼接 C.Chromas,用于显示DNA测序峰图文件 测序模板的要求 PCR产物直接测序 PCR已纯化产物:提供切胶回收纯化后的PCR产物20ul (浓度大于50 ng/μl), 并请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物10~20 μl(具体体积视客户反应数相应增加)。 未纯化PCR产物: 提供至少40ulPCR扩增原液,送样前取2ul经琼脂糖胶鉴定目的片断为明亮的一条带, 同时请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物10~20 μl (具体体积视客户反应数相应增加)。 Invitrogen Proprietary Confidential * 普通测序及测序相关基础知识——测序模板的要求 注意事项: PCR产物直接测序成功的关键是PCR产物的纯度,所以我们提倡用胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近,用电泳胶也无法分开时,此时的PCR产物直接测序会出现双峰,这种情况建议把PCR产物克隆后测序。PCR已纯化产物请用水稀释不要用elution bu
您可能关注的文档
- “两岸同心”大学生志愿者西部行活动协办方.doc
- 共振光散射方法研究钙存在下十二烷基苯磺酸钠的聚集行为 - 分析化学.pdf
- 报送科室:药剂科 - 宁夏医科大学总医院.doc
- 加热na 2 co 3.ppt
- 其中以青霉素、头孢霉素.ppt
- 锦屏超高压岩体水压致裂法地应力测试系统研制与应用 - 长江科学院.pdf
- 玻璃浆料键合中的孔洞抑制和微复合调控 - 光学精密工程.pdf
- sumo化对daxx亚细胞定位与功能的影响 - 生理学报.pdf
- “从rna提取到荧光定量pcr”解决方案rt-pcr原理简介rt-pcr技术 .ppt
- 氨基肽键羧基四肽(多肽).ppt
- 水利水电工程质量检测员继续教育系统基础考试试题及答案(各种收集).pdf
- 毕业论文设计模板.pdf
- 2025年云南省寻甸县第五中学高三下学期教学质量监测(一)数学试题试卷含解析.doc
- 2025年云南省玉溪市师院附中高三数学试题寒假周考试卷含解析.doc
- 2025年云南省玉溪市新平一中高三第一次教学质量监测(4月)数学试题含解析.doc
- 2025年云南省玉溪市新平一中高三下学期考前模拟考试数学试题含解析.doc
- 2025年云南省宣威市第四中学招生全国统一模拟考试数学试题含解析.doc
- 2025年云南省元江民中高三下学期二模(4月)数学试题含解析.doc
- 2025年云南省元江县民族中学高三质量检查数学试题含解析.doc
- 2025年云南省沾益县第四中学下学期期中考高三试卷数学试题含解析.doc
文档评论(0)