一步阳离子柱层析高效纯化溶菌酶及其溶菌活性δ - 中国药房.pdf

一步阳离子柱层析高效纯化溶菌酶及其溶菌活性Δ 1，2＊ 3 1 1 2# 赵 林 ，蔡金艳 ，周 林 ，李黄金 ，周 联 （1.广东药学院生命科学与生物制药学院，广州 510006；2.广 州中医药大学临床药理研究所，广州 510405；3.广东药学院药科学院，广州 510006） 中图分类号 R284.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2013）01-0030-03 DOI 10.6039/j.issn. 1001-0408.2013.01.10 摘 要 目的：研究利用离子交换层析从鸡蛋清中快速高效地纯化溶菌酶的方法。方法：蛋清稀释后先利用等电点沉淀去除卵清 蛋白、类卵黏蛋白等部分杂质，之后利用快流速羧甲基-琼脂糖凝胶柱层析进行纯化，收集洗脱峰样品进行冷冻干燥；以十二烷基 硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测溶菌酶纯度，以溶壁浊度法检测酶活力。结果：在等电点除杂后，经一步阳离子柱纯化，溶菌酶 的纯度达到95％以上，比活力达到17600U/mg ，收率达到4.2mg （溶菌酶）/ml （蛋清）。结论：所建立的一步阳离子柱层析法可高 效快速地从鸡蛋清中纯化溶菌酶。 关键词 一步；阳离子柱层析；蛋清；纯化；溶菌酶；溶菌活性 Efficient Purification of Lysozyme by One-step Cation Column Chromatography and Its Bacteriolytic Activity Assay 1，2 3 1 1 2 ZHAO Lin ，CAI Jin-yan ，ZHOU Lin ，LI Huang-jin ，ZHOU Lian （1.School of Life Science and Biopharmaceu- tical ，Guangdong Pharmaceutical University ，Guangzhou 510006，China ；2.Institute of Clinical Pharmacology ， Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine ，Guangzhou 510405，China ；3.School of Pharmacy ， Guangdong Pharmaceutical University ，Guangzhou 510006，China ） ABSTRACT OBJECTIVE ：To study on how to purify lysozyme highly and efficiently from egg white by ion exchange chroma- tography. METHODS ：The egg white was diluted and then precipitated by isoelectric precipitation to remove ovalbumin and ovomu- cin ，etc. The supernant flowed into ethyloic-agarose gel for ion exchange chromatography. Samples of elution peak was collected and freeze-dried. SDSand bacteriolytic turbidimetry were used to identify the purity and activity of the products ，respective- ly. RESULTS ：After isoelectric precipitation and one-step column chromatography ，the purity of the products was over 95％，the spe- cific activity was 17600U/mg ，and the yield achieved 4.2mg （lysozyme ）per ml （egg white）. CONCLUSION ：One-step cation col- umn chromatography