一种用青霉素g合成的用于重金属离子免疫检测的 - researchgate.doc

一种用青霉素G合成的用于重金属离子免疫检测的人工半抗原青霉烯酸硫醇铜盐的合成与鉴定徐武, 谢鹏, 樊柳荫, 曹成喜*, 奚涛, 周培* ① 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢教育部重点实验室, 上海 200240上海交通大学农业与生物学院, 上海 200240* 联系人, E-mail: cxcao@peizhou@ 收稿日期: 2011-03-17; 接受日期: 2011-07-01 国家自然科学基金(批准号:和(批准号: 2007AA10Z401)资助 摘要 利用青霉素衍生物合成了一种新型的铜离子半抗原青霉烯酸硫醇铜盐(CMPA). 通过动物免疫实验: (1) 新合成的CMPA抗原具有很好的稳定性并且对免疫动物无毒害作用, 在实验中也没有发生动物中毒现象2) 免疫抗原(CMPA-BSA)能够刺激实验动物免疫系统产生效价高达150000的特异性抗体3) 抗血清中抗体对抗原OVA-GSH-CuCl的亲和性高于OVA-GSH, 表明抗体对铜离子具有特异亲和力. 上述结果示已成功合成了针对铜离子的半抗原CMPA及相关全抗原CMPA-BSA, 在环境及食品样品方面的铜离子免疫检测方面取得了明显的进步. 免疫检测 铜离子 半抗原 环境 食品样品 重金属是一类有毒且能长期存在的污染物, 其以不同水平存在于环境及各种类型的工农业产品中[1]. 不同于有机污染物能够完全降解成相关的无害产物, 金属离子仅能通过有限的几种化学和生物自律过程进行转化[2]. 更为严重的是, 自然界中的重金属可以通过生物富集作用进入人体并且在机体内长期存在, 这对人类的健康是一个严重的威胁[3]. 铜元素是生命活动中某些生物化学反应过程中必需酶类的必要组成成分, 但是和其他重金属元素一样, 在高浓度条件下铜元素也是有毒的[4,5]. 所有的这些因素都使得铜离子对环境和人类健康形成了潜在的威胁. 因此, 有必要对环境中的铜和其他重金属离子进行检测和鉴定. 传统的重金属检测技术是仪器分析法, 如原子吸收光谱法(AAS)电感耦合等离子光谱法(ICP-AES和ICP-MS)电位测定法等. 虽然这些方法能精确检测样品中的重金属含量, 但是它们都需要昂贵的实验设备和集中于相应的实验区域进行检测, 同时样品处理时间也较慢. 且, 仪器分析法通常无法提供关于金属氧化状态的信息. 在这种情况下, 以抗原-抗体反应的亲和性和特异性为基础的免疫检测技术为金属离子检测提供了一种新的思路. 与传统的仪器检测方法相比, 免疫检测技术具有明显的优势, 如省时费用低廉易操作便携可用于现场检测等, 同时免疫测定技术也具有很好的灵敏度和选择性. 免疫检测最早可追溯到20世纪50年代, 当时Yalow和Berson提出了关于定量免疫学方法发展的研究报告, 根据此法可以从体液中测定皮克级的胰岛素含量. 在随后的时间里, 免疫测定技术在生物医药农业和环境科学领域得到了广泛的应用[6,10,11]. 在重金属离子分析领域, 免疫检测技术也经历了一个漫长的发展过程[1217]. 20世纪80年代, Meares等[18~22]首次提出了可用于医学诊断放射显影分析的一系列金属-络合物-抗体复合物的合成方法. Blake等[23~29]通过BALB/c小鼠的相关抗原免疫实验对针对重金属的单克隆抗体的合成方法进行了系统性的研究, 另外还进行了用于金属检测的抗体传感器和相关重金属免疫分析方法构建方面的研究. 目前, 已发表了关于铅铟汞铀和镉的免疫分析技术的报道. 针对重金属离子的免疫检测方法的构建过程包括: 重金属离子半抗原的设计和合成, 合成重金属离子全抗原, 动物免疫实验, 抗血清检测, 免疫分析方法优化, 从血清中获得多克隆抗体, 筛选出针对金属离子特异的单克隆抗体, 将单克隆抗体应用于对重金属离子的免疫检测. 在所有步骤中, 半抗原的设计最为关键, 相关研究表明, 合适的半抗原设计决定了最终免疫检测中抗体的特异性和选择性[30]. 传统的半抗原设计方法是将金属离子共价连接到络合物分子(EDTA, DTPA)上. 这种模式的缺点是, 最终由金属络合物与载体蛋白复合物诱导产生的多克隆抗体大多数识别笼形的金属-络合物复合体, 而特定的金属离子本身[28,31]. Wylie等[17]提出了一种新的半抗原设计思路: 将汞离子共价连接到还原性谷胱甘肽的巯基上形成汞离子半抗原, 然后再将这种汞离子半抗原通过酰胺键连接到载体血蓝蛋白(KLH)上. 实验表明, 经抗原KLH-GSH-HgCl诱导产生的抗体能够特异性识别汞离子. 本文通过咪唑的催化作用, 将一种青霉素不稳定中间产物转化成了稳定的青霉烯酸硫醇汞盐(MMPA)和青霉烯酸硫醇铜盐(CMPA)[32,33].