家畜传染病学实验指导：巴氏杆菌病的实验室诊断 免费.docVIP

家畜传染病学实验指导：巴氏杆菌病的实验室诊断 实验九 巴氏杆菌病的实验室诊断 目 的 初步掌握巴氏杆菌病的微生物学诊断步骤和方法。 内容及方法 1．检查材料 大家畜取新鲜的实质器官(肝、脾、肾、患病的肺脏等)、管状骨、心血(焊封于毛细管内)，另做心血和实质器官的涂片数张；小动物或家禽可取完整的尸体。 2．镜检 将病料涂片染色(美蓝染色、革兰氏染色、瑞氏染色、姬姆萨染色等)镜检时，多杀性巴氏杆菌呈卵圆形，有明显的两极性染色，并可看到两极之间两侧的连线。血片用瑞氏或姬姆萨染色时，两极性菌呈蓝色或淡青色，红细胞染成淡红色(家禽红细胞含有紫色的核)。 3．培养 将病料分别接种于鲜血琼脂和普通肉汤，在37℃进行培养。多杀性巴氏杆菌在鲜血琼脂上呈较平坦、半透明的露滴样菌落，不溶血；在普通肉汤中呈均匀混浊，以后便有沉淀，振摇时沉淀物呈辫状升起。当分得纯培养后，可由培养物作涂片检查(多杀性巴氏杆菌在从培养基上所作的涂片中，大部分不表现两极染色性，而常呈球杆状或双球 状)，并根据其形态学：染色性(革兰氏染色)、培养特性、发酵性状及胆汁试验进行鉴定。本菌的主要生化特性如表9。 表9 多杀性巴氏杆菌的主要生化特性 运动力 靛基质试验 胆汁试验 葡萄糖 甘露醇 蔗 糖 卫茅醇 乳 糖 鼠李糖 - + - A+ A A A - - 4．动物试验 将病料研磨成糊状，用灭菌生理盐水稀释成1：5～1：10乳剂，接种于实验动物皮下或肌肉内，剂量为0.2～0.5ml。猪、牛、羊等家畜的病料可用小鼠或家兔；家禽的病料可用鸽、鸡或小鼠。实验动物如于接种后18～24h左右死亡，则采取心血及实质脏器作涂片镜检和接种培养基进行分离培养。根据病原菌的形态、染色、培养、生化等特性加以鉴定。在采取材料作培养、镜检完毕后，尚须对实验动物尸体进行剖检作病理变化观察。在接种局部可见到肌肉及皮下组织发生水肿和发炎灶；胸腔和心包有浆液性纤维素性渗出物；心外膜有多数出血点；淋巴结水肿并增大；肝脏淤血(如用鸡接种，尚可见到密布之小点坏死灶)。 复习题与作业 1．试述家畜、家禽巴氏杆菌病的微生物学检查程序。 2．当猪群中同时有猪肺疫和猪瘟存在的可疑时，从猪体分得巴氏杆菌是否可以确定猪肺疫的诊断?为什么?