タンパク质の溶解性向上技术 ―sep-tagについて - j-stage journals.pdf

生物物理48 （3），185-189 （2008） タンパク の SEP-tagについて 1 2 1 1 2VBL 1. はじめに 様に，試料の条件を適切に制御すれば，凝集は可逆的 である場合が多い．たとえば，等電点付近で凝集した タンパク質の溶解性* はその構造安定性と並んで重 タンパク質において，pH を等電点から遠ざけること 要な物理化学的性質である．たとえば，溶解性の低い によって再溶解することがよく行われる．これは，pH 組み換えタンパク質は，大腸菌などの微生物内で不溶 変性したタンパク質の溶媒のpH を中性付近に調整す 性画分に発現する可能性が高いだけでなく，高濃度の ることでタンパク質を天然状態に戻すことと同様な現 試料が必要とされるNMR 解析やX 線結晶構造解析も 象であり，pH の変化による凝集がpH 変性と同じよう 困難である．タンパク質の溶解性は，従来からその疎 に可逆的であることを示唆している． 水性 ・親水性と総電荷や分子表面の電荷分布などに 本稿では，タンパク質の凝集を，天然構造を保持し よって決まると考えられているが，これらの因子とタ ンパク質の溶解性の定量的な関係は，まだ解明されて いない．そのため，タンパク質が凝集した際には，研 究者は自らの勘と経験を頼りに実験条件を最適化せざ るおえない現状がある．本稿では，最近のタンパク質 工学的手法を用いた代表的な溶解性向上技術を包括的 に紹介するとともに，われわれが開発した短いペプチ ド系タグ （Solubility enhancement peptide (SEP)-tag1））の 溶解性向上効果について述べ，タンパク質の溶解性に 寄与する因子や作用機序について考察する． な えにもとづいた の 2. 生化学実験では，凝集したタンパク質を回収して再 利用することはあまり行なわないため，凝集形成は不 可逆的な過程であるとよく考えられている．しかし， タンパク質の構造安定性を熱力学的に解析する際と同 1 4 * a c b Methods for Enhancing Protein Solubility and the Effect of SEP-Tags on Protein Solubility Atsushi KATO1, Naoshige IZUMIKAWA2 and Yutaka KURODA1 1Department of Biotechnology and Life Science, Tokyo University of Agriculture and Technology 2VBL, Tokyo University of Agriculture and Technology 185 Vol.48 No.3 2008