溶藻弧菌acfa 基因克隆与生物信息学分析 - 中国水产期刊网.pdf

第 34 卷 第 1 期 广东海洋大学学报 Vol.34 No.1 2014 年 2 月 Journal of Guangdong Ocean University Feb. 20 14 溶藻弧菌 acfA 基因克隆与生物信息学分析 1,2,3 1,2,3 1,2,3 程海燕 ，庞欢瑛 ，鲁义善 ， 1,2,3 2,3,4 1,2,3 简纪常 ，吴灶和 ，蔡双虎 （1. 广东海洋大学水产学院 // 2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 // 3. 广东省普通高等学校水产经济动物病害控 制重点实验室 ，广东 湛江 524088 ；4. 仲恺农业工程学院 ，广东 广州 510225 ） 摘 要：溶藻弧菌引起海水养殖产业弧菌病的主要病原 ，附着定植因子基因 acfA 是溶藻弧菌重要毒力基因之一 ， 其表达产物是溶藻弧菌有效定植在宿主肠道上所必需的蛋白 。根据弧菌属细菌 acfA 基因基因保守区设计引物 ，采 用 Touchdown PCR 扩增 acfA 基因部分序列 ，Inverse PCR 和 Nested PCR 扩增已知序列侧翼序列 ，成功克隆了溶藻 弧菌 acfA 基因全长 。克隆的 acfA 基因序列全长为 743 bp ，开放阅读框长度为 648 bp 组成 ，共编码 215 个氨基酸 ， 在 5′端上游未发现-35 区和-10 区序列。演绎的 ACFA 蛋白 N 端有 18 个氨基酸信号肽序列 ，表明该蛋白是分泌 型蛋白 ；蛋白结构分析表明主要由 α螺旋和不规则卷曲构成 。BLAST 分析表明 ，该蛋白氨基酸序列与其他弧菌相 应蛋白同源性较高 ，是较保守的外膜蛋白 。 关键词：溶藻弧菌 ，acfA 基因 ；克隆 ；蛋白结构 中图分类号：Q785 ；S941.42 文献标志码：A 文章编号：1673-9159（2014 ）0 1-0009-06 Cloning and Bioinformatics Analysis of acfA Gene from Vibrio alginolyticus CHENG Hai-yan1,2,3, PANG Huang-ying1,2,3, LU Yi-shan1,2,3, JIAN Ji-chang1,2,3, WU Zao-he2,3, 4, CAI Shuang-hu1,2,3 （1. Fisheries College, Guangdong Ocean University // 2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals // 3. Key Laboratory of Control for Diseases of Aquatic Economic Animals of Guangdong Higher Education Institutes , Zhanjiang 524088, China; 4 Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guang