乳酸脱氢酶a（ldha）基因的克隆与原核表达 - 重庆理工大学学报.pdf

第２６卷　第１１期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１２年１１月 Ｖｏｌ．２６　　Ｎｏ．１１ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｎｏｖ．２０１２  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１２．１１．００５ 乳酸脱氢酶Ａ（ｌｄｈａ）基因的克隆与原核表达 ａ，ｂ ａ ａ 袁　军 ，许香雅 ，沈榕强 （福建农林大学　ａ．生命科学学院；ｂ．生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州　３５０００２） 摘　　　要：乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶，在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸；当动物体内缺 乏葡萄糖时，还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录ＰＣＲ 获得了Ｈｅｌａ细胞中的ｌｄｈａ基因，并将它克隆到ｐＥＴ２８ａ（＋）载体上，获得重组表达载体ｐＥＴ２８ａ （＋）－ｌｄｈａ。重组质粒通过转化法转入宿主 Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）溶源菌中。ＳＤＳＰＡＧＥ分析表 －１ 明，在１．０ｍｍｏｌ·Ｌ 异丙基硫代－ －Ｄ半乳糖苷 （ＩＰＴＧ）的诱导下，重组子成功表达了一条 β 分子质量约为３６ｋＤａ的目标蛋白。 关　键　词：Ｈｅｌａ细胞；ｌｄｈａ基因；克隆；原核表达 中图分类号：Ｑ７８　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１２）１１－００２３－０４ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩｄｈａＧｅｎｅ ａ，ｂ ａ ａ ＹＵＡＮＪｕｎ ，ＸＵＸｉａｎｇｙａ，ＳＨＥＮＲｏｎｇｑｉａｎｇ （ａ．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ；ｂ．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙ， ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｌａｃｔｉｃｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｓｏｎｅｋｉｎｄｏｆｅｎｚｙｍｅｓｉｎｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ．Ｉｔｃａｎｃａｔａｌｙｚｅｔｈｅｐｙｒｕｖｉｃ ａｃｉｄｉｎｔｏｌａｃｔｉｃａｃｉｄｕｎｄｅｒｔｈｅａｎａｅｒｏｂｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｗｈｅｎａｎｉｍａｌｂｏｄｙｌａｃｋｓｔｈｅｇｌｕｃｏｓｅ，ｉｔｍａｙａｌｓｏ ｏｘｉｄｉｚｅｔｈｅｌａｃｔｉｃａｃｉｄｔｏｐｙｒｕｖｉｃａｃｉｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｔｉｎｔｏｇｌｕｃｏｓｅｂｙｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｖｉｖｏ．Ｉｎｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｌｄｈａｇｅｎｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍＨｅｌａｃｅｌｌｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃ ｔｉｏｎ（ＲＴＰＣＲ）ｍｅｔｈｏｄ．ＡｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｆｏｒｌｄｈａ ｇｅｎｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｗｉｔｈｖｅｃｔｏｒｐＥＴ２８ａ（＋）．ＳＤＳＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ ｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐＥＴ２８ａ（＋）－ｌｄｈａｐｒｏｄｕｃｅｄａｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｍｏ －１ ｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆ３６ｋＤａｗｈｅｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙ１．０