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说 明 书 尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌枯萎病是一类植物病害的总称，因病原菌的侵害，造成植物枯死萎蔫枯萎病有细菌性病原（如香蕉细菌性枯萎病等）和真菌性病原两种本所指的枯萎病为真菌性病原，是由镰刀菌属真菌寄生引起的一种世界性的真菌土传病害，其中尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.)是主要病菌种类之一尖孢镰刀菌属半知菌类（Fungiimperfecti）、梗孢目（Moniliales）、痤孢科（Tubercular）、镰刀菌属（Fusarium）．自从Snyder和Hansen（1940）把镰刀菌属美丽组内的种合并为1个，成为尖孢镰刀菌（F. oxysporum）寄主范围：（1）经济作物：棉花、油桐、蓖麻、亚麻等（2）茄科作物：番茄、胡椒、茄子、烟草、马铃薯等（3）瓜类作物：黄瓜、节瓜、冬瓜、西瓜、南瓜、西葫芦、甜瓜、丝瓜、白瓜、越瓜、苦瓜、葫芦瓜、哈密瓜等（4）豆科作物：大豆、四季豆、豇豆、猪屎豆、豌豆等（5）花卉植物：康乃馨、郁金香、鱼尾菊、非洲菊、鸢尾、水仙、翠菊、合欢、百合、仙人掌、穿心莲、一品红、草坪草等（6）林果植物：松树、相思树、柑桔、沙棘、水杉、铁线莲属植物、梨树等（7）其它植物：莴苣、小麦、大蒜、荸荠、芦笋、姜、香蕉等植株被尖孢镰刀菌侵染后，发病症状多种多样，一般导致维管束枯萎、植株枯黄、球茎和根腐烂，植株生长衰弱植株发病后，最初的症状表现嫩叶上出现轻微的褪绿，而后老叶开始下垂．苗期植株发病后迅速死亡；成株期产生叶脉失绿和叶片下垂，植株生长缓慢、下部叶片黄化、不定根形成、叶片和嫩茎萎蔫、落叶、剩余叶片边缘坏死，最终导致全株死亡维管束组织的褐变是尖孢镰刀菌引起的枯萎病最明显的特征，如西瓜枯萎病在较老的植株上，从盛花期到果实成熟期，症状会变得更明显应用了弱株系交互保护作用的原理利用无致病力尖孢镰刀菌产生诱导抗性作用枯萎病无致病力菌株能诱导寄主的抗病机制如王守正等研究了西瓜、黄瓜对枯萎病和炭疽病的诱导抗病机制，结果发现西瓜、黄瓜经枯萎病无致病力菌株诱导后与抗病性有关的过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶活性明显增强，酚类物质和木质素含量增多西瓜、黄瓜对枯萎病的诱导抗病机制和黄瓜对炭疽病的诱导抗病机制基本一致用从西瓜维管束中分离到的尖孢镰刀菌无致病力菌株F0-3和茄病镰刀菌无致病力株F5-1诱导处理西瓜幼苗，能使西瓜产生对枯萎病的抗性然而作为微生物之间的这种干扰作用，往往因各种因素影响产生变化，如无致病力尖孢镰刀菌会恢复致病力、失去竞争力等，导致保护作用降低，因而，在大面积应用上必须尖孢镰刀菌无致病力菌株无致病力尖孢镰刀菌诱导寄主的抗病机制枯萎病尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌无致病力菌株尖孢镰刀菌无致病力菌株枯萎病尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌β-尖孢镰刀菌ITS尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌β-PSA液体培养基。 所述尖孢镰刀菌β-Na2HPO4－柠檬酸缓冲液。 所述的Na2HPO4－柠檬酸缓冲液加入量为0.9 mL。（范围值），Na2HPO4浓度为：0.2 mol/L，柠檬酸浓度为：0.1 mol/L。（范围值）。 所述尖孢镰刀菌β-尖孢镰刀菌β-1）菌株的培养和发酵滤液的收集，采用PSA液体培养基，25 ℃条件下，培养14 d后，用双层纱布过滤除去菌丝，取上清液进行测定。（2） β-葡萄糖苷酶活性测定方法，稀释的粗酶液中加入0.9 mL Na2HPO4－柠檬酸缓冲液，经反应后测吸光值OD。以加热失活的酶液按照同样的方法处理作空白。（3）β-葡萄糖苷酶活性的表示方法，在上述条件下，每毫升酶液每分钟水解产生1 μmol的对硝基苯酚的酶活力，定义为一个酶活单位。 所述的尖孢镰刀菌ITS尖孢镰刀菌ITSPrimer 1: 5’CTTGCGTTGATTACGTCCC 3’； Primer 2(ITS4): 5’TCCTCCGCTTATTGATATGC 3’。 所述的尖孢镰刀菌ITS尖孢镰刀菌ITS （3）PCR扩增，（4）扩增产物检测，取 PCR产物在含有1.5%的琼脂糖凝胶中电泳以检查扩增结果，然后在Gel Doc 2000凝胶成像系统（Bio-Rad）上观察并贮存图像。 尖孢镰刀菌28℃ ，轻微振荡培养（提高通气量，促进发芽），4d 后转移至32℃ 的人工气候箱培养，观察用各菌株不同处理组对黄瓜植株的致病力差异，选择无发病组的菌株。培养至第14 d时取各处理组植株，检测植株的根、茎基部、茎中部、茎顶部的菌的存在情况。方法：取植株的根、茎基部、茎中部、茎顶部组织用0.1%升汞表面消毒后用无菌水清洗后置于PSA 培养基平板上培养。 本发明建立了一套尖孢镰刀菌尖孢镰刀菌无致病力菌株枯萎病尖孢镰刀菌无致病力菌株能诱导寄主的抗病机制以产生诱导抗性作用应用弱株系交互保护作用的