补骨脂抗氧化活性指纹图谱研究 - 天津中医药大学期刊网.pdf

天 津 中 医 药 2011 年4 月第28 卷第2 期 158 Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine Apr． 2011,Vol．28 No．2 补骨脂抗氧化活性指纹图谱研究* 常艳旭，朱子微，李 晋，张秋红，康立源，张伯礼 （天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津 300193） 摘要：[目的] 建立补骨脂抗氧化活性指纹图谱，评价不同产地补骨脂药材的抗氧化活性和明确抗氧化活性成分 的贡献率。[方法] 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器-1 ，1-二苯基-2-苦基肼（HPLC-DAD-DPPH）方法。[结果] 建立了补骨脂抗氧化活性指纹图谱，确定了补骨脂酚为最主要的抗氧化活性成分。[结论] 抗氧化活性指纹图谱可用 于补骨脂质量评价，为全面提高中药质量控制水平提供了新方法。 关键词：补骨脂；抗氧化活性指纹图谱; 高效液相色谱-二极管阵列检测器-1 ，1-二苯基-2-苦基肼 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1519(2011)02-0158-03 中药补骨脂为豆科植物补骨脂的干燥果实，始 河南（S13）、江苏（S19）、山西（S20）。1，1-二苯基-2- 载于《雷公炮灸论》，其性温，味辛、苦，入脾、肾经，具 苦基肼（DPPH ，美国Sigma-aldrich 公司）。乙腈为 有补肾壮阳、纳气、止泻的功效。文献报道补骨脂具 色谱纯，实验用水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 有抗肿瘤、雌激素样作用、抗氧化，抗菌、抗病毒等药 1.2 方法 [1] 理作用 。近年来，有学者采用脂类氧化稳定性快速 1.2.1 对照品溶液的制备 精密称取5.0 mg 槲皮 自动测定仪（OSI）抗氧化方法发现补骨脂具有抗氧 素，至5 mL 容量瓶中，以甲醇定容，得到 1 g/L 的槲 [2-3] 化活性 ，但其抗氧化活性的物质基础及基于活性 皮素对照品溶液。 对不同来源药材进行质量评价未见报道。 1.2.2 供试品溶液的制备 精密称取补骨脂1.000 g， 本研究以补骨脂为例，拟利用高效液相色谱- 加入70%(v ：v) 甲醇，定容至10 mL 容量瓶中，摇匀， 二极管阵列检测器-1 ，1 - 二苯基-2 - 苦基肼 超声提取40 min ，放冷，加70% （v ：v）甲醇稀释至 （HPLC-DAD- DPPH）技术，建立中药抗氧化活性指 刻度，摇匀，14 000 r/min 离心10 min，取上清液，以 纹图谱，对补骨脂中抗氧化成分进行快速筛选，并基 0.45 μm 的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试液，进 于抗氧化活性对不同产地补骨脂进行质量评价。 样10 μL 测定。 1 材料与方法 1.2.3 DPPH 甲醇溶液的配置 精密称取DPPH 1.1 仪器与试剂 25 mg ，置500 mL 容量瓶中，用甲醇定容，0.45 μm 1.1.1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪，包括在 微孔滤膜过滤，避光放置。新鲜配制的DPPH 甲醇溶 线真空脱气机、高压四元梯度泵、自动进样器、柱温 液静置 1 h 后，进行样品测定，并于6 h 后重新配置 箱、二极管阵列检测器(DAD) ( 美国Agilent 公司) 、 使用。 waters 515 HPLC 泵。 1.3 HPLC-DAD-DPPH 分析条件 [4] 1.1.2 试剂 槲皮素标准