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第35卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第10期 2(Xj7年10月 ChineseJournalofAnalyticalChemist叮 1415~1420 改进荧光光谱法研究药物与血清白蛋白的相互作用 谭韬 黄锐 夏之宁’ (重庆大学化学化工学院，重庆4以刃30) 摘 要 为了解决蛋白与药物分子的荧光光谱相互作用分析存在的缺点，采用小分子为荧光检测对象，以血 清白蛋白(SA)为碎灭剂，研究了模拟生理条件(pH二7.4)下伯氨喳、十二烷基苯磺酸钠和西酞普兰与SA的 相互作用。测得伯氨喳、十二烷基苯磺酸钠和西酞普兰与SA的结合常数凡分别为8.16xl了Umol、4.14x 106Umol和6.08xro7仃mol。这种改进荧光光谱法能更准确和全面地表达出sA与药物的相互作用信息。 通过紫外吸收光谱相互作用分析法对改进方法进行了验证。并推测出药物与蛋白之间存在一种”点对面”的 作用方式。 关键词 荧光光谱法，牛血清白蛋白，相互作用，伯氨唆，西酞普兰，十二烷基苯磺酸钠 1 引 言 血清白蛋白(sernmalbumin，SA)在血液中起着重要的储存和转运作用，能与许多内源性和外源性 化合物结合川，对药物在体内的代谢和分布产生很大影响。因此，研究药物与sA的结合是药物动力学 和临床药理学的重要内容’]〔。目前，广泛采用以sA为检测对象的经典荧光光谱法’【一，】进行sA与药物 相互作用的研究。在人e、二280nm时，sA的荧光主要来源于色氨酸(御)残基6」〔，其荧光谱图反映出的 主要是Trp残基的荧光信息。可以认为，经典荧光光谱法用Trp残基荧光变化信息来代表整个SA与药 物相互作用的信息可能是不全面的。一些有荧光的药物分子的荧光谱图所反映的信息，是其整体分子 性质的表达。所以，以该小分子为检测对象，考察相互作用体系中SA对该小分子荧光性质的影响，就 能获得二者准确且全面的相互作用信息。针对经典荧光光谱法的不足，本研究提出了改进荧光光谱法。 本研究以抗疟药伯氨喳、除蜻药十二烷基苯磺酸钠和抗抑郁药西酞普兰为研究对象，分别用改进荧 光光谱法、经典荧光光谱法和紫外光谱法，研究了它们与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用，考察了经典 荧光光谱法与改进荧光光谱法获得的结合常数及热力学函数之间的差异，通过紫外光谱对改进方法进 行了验证，并推测了药物与BSA之间的作用方式。 2 实验部分 2.1 仪器和试剂 RF一301PC荧光分光光度计(日本岛津公司);UV2450紫外分光光度计(岛津苏州公司)。牛血清 白蛋白(BsA，纯度98%，Genview分装)，加蒸馏水配制成lx10一4moFL储备液，1一4℃保存;伯氨唆 (primaquine，PQ，纯度95%，漂阳市永安热固性塑料有限公司)、十二烷基苯磺酸钠(sodiumdodecyl benzenesulfonate，SDBS，分析纯，成都科龙试剂厂)和西酞普兰(cital叩ram，CIT，纯度98.5%，重庆莱美 药物技术有限公司)，均配制成lxlo一’m0FL储备液;配制20mmoFL磷酸盐缓冲液 (含0.lmoUL NaCI，pH=7.0)。所用试剂均为分析纯;实验用水均为一次蒸馏水。 2.2 实验方法 2.2.1经典荧光光谱法 在一系列romL容量瓶中，加人相同体积的BSA储备液，再加人不同体积的 碎灭剂(如小分子药物)储备液，用缓冲溶液定容。在室温下，以BSA为检测对象，考察BSA荧光光谱 的变化情况。 2(X)7一2一10收稿;2(X)7一5一13接受 本文系国家自然科学基金(No和教育部跨世纪人才培养计划(NO.教技函2【001」3号)资助项目