先做重组dna药物单元.ppt

* 基因工程(跨课程)综合性实验 生命科学与生物制药学院 李黄金 前言 　　作为我院的本科生，了解生物技术药物研究、开发和生产的过程，掌握与生产工艺和质量控制研究密切相关的技术手段是非常必要的。 生命科学与生物制药学院 前言 　　以蛋白质为基础的基因工程药物和基因工程抗体是当今最主要的生物技术药物形式， 　　以DNA为基础的基因治疗制剂和DNA疫苗是未来生物制药的主要发展方向之一。 前言 　　《基因工程》、《发酵工艺学》和《生物技术药物药剂与药动学》 　　本综合性实验即为上述三门课程的跨课程综合性实验。 综合实验 I 重组蛋白质类药物 Ⅱ 重组ＤＮＡ类药物 5、表达进程与影响因素分析 4、工程菌生长曲线分析 2、工程菌表达筛选 6、工程菌发酵 7、表达产物分离纯化 3、工程菌甘油种制备 1、工程菌构建 1、TCR工程菌构建 3、TCR质粒-脂质体复合物制备 4、TCR体外基因转染 2、TCR质粒DNA大规模制备 5、TCR转染基因表达检测 6、TCR转染体外活性检测 7、TCR转染体内试验（药代、药效） 综 合 实 验 项 目 转染T细胞体外活性检测之二：流式细胞仪分析细胞凋亡 准备 第7天 10/6月 星期日 转染T细胞目的基因表达检测：T细胞-肿瘤细胞共培养、流式样品制备和检测 准备 第6天 9日/6月 星期六 转染T细胞体外活性检测之一： 肿瘤细胞接种，培养 表达影响因素试验SDS表达进程试验 第5天 8日/6月 星期五 质粒-脂质体复合物制备、包封率测定、T细胞体外基因转染 工程菌甘油种制备 表达影响因素试验表达进程试验接种 第4天 7日/6月 星期四 质粒DNA大规模制备：层析纯化、电泳鉴定、紫外吸收法测定质粒纯品纯度和浓度 工程菌表达筛选SDS－PAGE （凝胶保存备用），选定菌株，接种 第3天 6日/6月 星期三 质粒DNA大规模制备：碱法裂解、中和、异丙醇沉淀、洗盐 工程菌表达筛选（温控表达诱导） 工程菌生长曲线分析 第2天 5日/6月 星期二 Pm：单元讨论、TCR工程菌构建、TCR菌种活化接种 Pm：单元讨论、IL-18工程菌构建、 IL-18菌种活化接种和平板划线接种 Am：综合实验公开课（课室：B2-314，8:30准时开始） 第1天 4日/6月 星期一 04（2）班 （先做重组DNA药物单元） 04（1）班 （先做重组蛋白质药物单元） 班级 日程 实 验 日 程 工程菌表达筛选SDS－PAGE （凝胶保存备用），选定菌株。 质粒DNA大规模制备：离子交换层析纯化、电泳鉴定、紫外吸收法测定质粒纯品纯度和浓度 第12天 15日/6月 星期五 工程菌表达筛选（温控表达诱导） 工程菌生长曲线分析 质粒DNA大规模制备：碱法裂解、中和、异丙醇沉淀、洗盐 第11天 14日/6月 星期四 下午： 重组蛋白药物单元开始，IL-18接试管与平板划线接种 表达产物产物的分离纯化（示教） 试验结果分析与讨论 重组DNA药物单元开始， TCR菌种接种 第10天 13日/6月 星期三 准备 SDS凝胶扫描分析（三次电泳胶） 发酵罐观摩（418室） 第9天 12日/6月 星期二 转染T细胞体内给药实验 试验结果讨论与分析、看病理与免疫组化照片 表达进程分析SDS（胶保存备用） 第8天 11日/6月 星期一 04（2）班 （先做重组DNA药物单元） 04（1）班 （先做重组蛋白质药物单元） 班级 日程 实 验 日 程 表达产物产物的分离纯化（示教） 试验结果分析与讨论 转染T细胞体内给药实验 试验结果讨论与分析 第19天 22日/6月 星期五 SDS凝胶扫描分析（三次电泳胶） 发酵罐观摩（418室） 转染T细胞体外活性检测与目的基因表达检测：流式细胞仪分析 第18天 21日/6月 星期四 表达进程分析SDS（胶保存备用） 转染T细胞体外活性检测：T细胞与肿瘤细胞共培养 第17天 20日/6月 星期三 表达影响因素试验SDS（胶保存备用） 表达进程试验（IPTG诱导、不同时间点取样） 转染T细胞体外活性检测：肿瘤细胞接种，培养 第16天 19日/6月 星期二 工程菌甘油种制备 表达影响因素试验表达进程试验接种（GST菌种） 质粒-脂质体复合物制备、包封率测定、T细胞体外基因转染 第15天 18日/6月 星期一 下午接种（每组派1个代表） 下午接种（每组派1个代表） 第14天 17日/6月 星期日 准备 准备 第13天 16日/6月 星期六 04（2）班 （先做重组DNA药物单元） 04（1）班 （先做重组蛋白质药物单元） 班级 日程 实 验 日 程 实验分组 每个班按学号顺序分为8组，组号按序依次为1－8组。 每组人数分别为9、9、9、8、8、8、8、8。 涉及到排序的实验项目，如在超净工作台上的接种步骤，