采用盐析及q sepharose ff分离纯化酪蛋白胃蛋白酶水解物中的酪 .pdf

※工艺技术 食品科学 2005, Vol. 26, No. 8 255 采用盐析及Q Sepharose FF分离纯化酪 蛋白胃蛋白酶水解物中的酪蛋白糖巨肽 刘剑虹，庞广昌，吴瑞巍 (天津商学院食品科学与工程系，天津 300134) 摘 要：本文探讨了利用了 (NH4)2SO4分级沉淀、透析脱盐及Q-Sepharose FF层析分离纯化酪蛋白的胃蛋白酶水解 物中的CGMP的工艺。结果表明：采用 60%饱和度的(NH4)2SO4盐析，可从上清液中直接回收高纯度CGMP， 得率为0.71%。低饱和度的(NH4)2SO4可有效脱除杂蛋白。脱盐粗提物CGMP Q-Sepharose FF层析条件为：pH8.5、 20mmol/L Tris缓冲液平衡上样，用含0.3mol/L NaCl、20mmol、pH7.1的Tris缓冲液洗脱；浓缩物最大上样量为 34.2mg蛋白/ml树脂。利用优化的工艺对水解液层析纯化，纯化产物得率约为2.19%(以酪蛋白计)，总结合态唾液 酸回收率为87.4%(以酶解液中的唾液酸计)，糖基化度可提高到0.472以上。整个工艺路线简便、快捷、成本较 低，适合工业化生产。 关键词：酪蛋白糖巨肽(CGMP)；胃蛋白酶；盐析；离子交换层析；唾液酸 from Pepsin LIU Jian-hong，PANG Guang-chang，WU Rei-wei Abstract： ammonium sulfate precipitation； effectively； fast ,low cost and suitable for industry. Key words：casein glycomacropeptide (CGMP)；pepsin；salting-out；ion-exchange chromatography；sialic acid 中图分类号：TS252.1 文献标识码：A 文章编号： 在干酪生产中，凝乳酶作用于牛乳酪蛋白，可水 糖基化程度不同，在TCA溶液中的溶解度也就不同， 解释放出κ-酪蛋白的C-端106～169残基片段。这部分 其中在12%TCA溶液中可溶的CMP含κ-酪蛋白全部糖 [1] 水溶性的肽段被称为酪蛋白大肽(caseinomacropeptide， 链，被称为糖巨肽(glycomacropeptide，简称GMP)。 简称CMP)。研究表明，κ-酪蛋白上的碳水化合物都 通常，可将酪蛋白来源的此类多肽统称为酪蛋白糖巨肽 在此片段，由于κ-酪蛋白上的糖链的非均相性，CMP (CGMP)。GMP的化学组成非常独特，不含有苯环氨基 收稿日期：2005-06-18 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：刘剑虹(1963-)，女，副教授，在读博士，研究方向为食品化学与生物技术。 256 2005, Vol. 26, No. 8 食品科学 ※工艺技术 [2] 酸且带有含唾液酸的低聚糖糖链 ，因而具有许多重要 ４℃50%TCA溶液使TCA的终浓度达到12%，低温静 [3～5] 的生理活性功能 ，主要为：⑴抗微生物活性；⑵糖 置后4000r/min离心30min，收集全部上清液于透析袋(截 巨肽中的唾液酸可抑制细菌和病毒在宿主细胞表面的附 流分子量 8000～13000)中，对水透析6h，勤换水，使 着和定植；⑶可与霍乱毒素和大肠杆菌毒素结合，使其 pH达到7.0。用聚乙二醇10000将透析内液浓缩，即获