兔间充质干细胞体外培养及软骨形成的实验研究.pdfVIP

歹565507 兔间充质千细胞体外培养及软骨形成的实验研究 摘要 兔间充质干细胞体外培养及软骨形成的实验研究 摘 要 目的：研究碱性成纤维生长因子CoFGF)的不同浓度及同转化生长因子(TGF-131) Stem Cells，MSCs)增殖的影响，研 联合作用，对兔间充质干细胞(Mesenchymal 究不同因子和培养时间对兔MSCs体外软骨形成的影响。观察MSCs与细胞支架 的结合性。 方法：取兔股骨颈的MSCs经梯度离心，分离培养。观察原代细胞以及传代细胞 生长特性。(1)取P4代细胞，分7组，5组分别加入不l司浓度(O，10，50，80， 1、bFGF序贯加入和同时加 100ng／m1)bFGF的培养液(DMEM)，2组为TGF-p 入，培养4天后，MTT法测定各组MSCs吸光值，分析细胞增殖差异。(2)取P3、 Ps、P7、P10代细胞，在生长因子bFGF+TGF-8l(20ngtml)诱导下培养4天，甲 苯胺蓝染色，RT．PCR半定量检测各代细胞II型胶原的表达量。同时检测P3代 软骨细胞和经bFGF诱导P5代MSCsII型胶原的表达量。(3)将P4代MSCs细胞 接种到聚左旋乳酸(PLLA)支架上，体外培养1月，扫描电镜观察细胞在支架上 的生长形态。 (P0．05)。TGF．13 l(20ng／m1)诱导MSCs的软骨形成，甲苯胺蓝 用(P0．05)。bFOF(20ng／m1)+TGF．13 染色呈异染性，RT．PCR检测II型胶原阳性表达，灰度值比较，两种因子 bFGF+TGF．13 l联用大于单因子bFGF作用；随培养时间的延长，该值增加， P，代细胞达最大(P0．01)。扫描电镜见细胞与支架结合呈多样性，细胞周围有 、 基质出现。 结论：生长因子bFGF对MSCs的促增殖作用与浓度相关。两种生长因子(bFGF, TGF-p 1)问有相互促进作用。MSCs体外软骨生成随细胞培养时间的延长，存在 一个峰值。细胞与支架能良好地结合。 关键词：间充质干细胞生长因子增殖体外软骨形成支架 作 者：谢宗刚 指导老师：董启榕教授 兔问充质千细胞体外培养及软骨形成的实验研究 摘要 ofexvivocultureand ofrabbit Study chondrogenesis cells mesenchvmalstem Abstract of stem cells(MSCs)affected mesenchymal by objeetive：Tostudyproliferation in bFOF谢mTGF一0v