鸡骨草对HepG2.2.15细胞HBeAg和HBsAg的抑制作用.pdfVIP

时珍国医国药2012年第23卷第4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2012VOL．23NO．4 鸡骨草对 HepG2．2．15细胞 HBeAg和 HBsAg的抑制作用 韦 敏 ，陈晓白 (1．玉林市卫生学校，广西 玉林 537000； 2．玉林师范学院广西玉林 537000) 摘要 ：目的观察鸡骨草(JGC)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法 采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测鸡骨草对 HepG2．2．15细胞的半数毒性浓度(TC5。)和最大无毒浓度(TC。)；在Tc。基础上观察不同浓度药物作用于HepG2．2．15细 胞，分别在第72小时和 144小时收集细胞培养上清液，采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)法测定上清液HBsAg和HBeAg 的滴度。结果 Tc50为41．85 L，Tco为8．93g／L，鸡骨草可有效地抑制细胞HBsAg和HBeAg的分泌；在作用 144h、浓 度为8 L时对HBsAg、HBeAg抑制作用最为明显，抑制率分别为29．8％和32．4％。结论 鸡骨草在体外有一定的抗 HBV的作用，且毒性较低。 关键词 ：鸡骨草；HepG2．2．15细胞；HBsAg，HBeAg DOI标识 ：doi：10．3969／j．issn．1008-0805．2012．04．085 中图分类号：R285．5 文献标识码 ：B 文章编号：1008-0805(2012)04-0972-02 鸡骨草为豆科相思子属植物 ，具有清热解毒、利湿、活血化 2．2 细胞培养 HepG2．2．15细胞用含 15％胎牛血清、0．03％L 瘀、舒肝止痛等功效 ，常以复方人药 ，在肝胆疾病治疗、抗乙肝 一 谷氨酰胺、G418380 g／ml、卡那霉素50U／ml，pH为7．2的 病毒方面取得较好的效果。中国的广东、广西等地有丰富的鸡骨 MEM培养液常规培养。细胞消化液为含0．25％胰蛋 白酶，用 D — 草资源，为了更好地开发、利用这一丰富的中草药资源，进一步明 Hanks配制。 确鸡骨草抗乙肝病毒的作用，本研究以HepG2．2．15细胞株 为 2．3 MTY法测鸡骨草对HepG2．2．15细胞毒性实验 细胞用 研究对象，研究鸡骨草体外抗 HBV作用。 胰酶消化后制成 5X10个 ／ml细胞悬液，接种于96孔板，每孔 1 材料与仪器 100Ixl，置于孵箱 (37℃，5％CO：)中培养24h后，细胞贴壁且生 1．1 药物 鸡骨草醇提液(购于玉林市中药材市场，由玉林师范 长 良好，吸除全部培养液，加入用完全培养液将鸡骨草醇提液5 学院生科院提取)；拉米夫定 (Lamivudine，3TC，葛兰素史克制药 倍稀释成400，80，16，3．2，0．64，0．128g／L的应用液 100 l，每个 有限公司产品)。 质量浓度设6个复孔。连续培养72h，培养结束前4h，每孔加入 1．2 细胞株 HepG2．2．15细胞株，由美 国TheMountSinaiMedi— MTT1O l，于 CO2孵箱中继续培养。4h后小心吸弃上清液，每 calCenter于1987年构建的，由广西中医学院提供 ，本室 自行传 孔加 DMSO100 l，微量振荡器振荡5min，使结晶紫完全溶解。 代 ，定期用G418(一种筛选抗生素)筛选。 全 自动酶标仪 (检测波长570nm，参考波长630nm)读取各孔 OD 1．3 试剂 HBsAg(乙型肝炎表面抗原)和 HBeAg(乙型肝炎 E 值 ，记录结果。按Reed—Muench法计算半数细胞毒浓度 (TC ) 抗原)酶联免疫检测试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司)；MEM 和最大无毒浓度 (TC)。 培养基 (美国Gibco公司)；胎牛血清