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福建师范大学 福建省农业科学院 全日制学术学位研究生 学位论文开题报告 论文题目： 青枯雷尔氏菌胞外蛋白指纹图 谱多态性研究 报 告 人： 代升飞 申请学位： 硕 士 所在学院： 生命科学学院 年级学号： 学科专业： 微生物学 研究方向： 工业微生物 指导教师： 刘 波 博士、研究员 报告时间： 2013年月日 福建师范大学研究生院 制表 2013年1月6日填 一、国内外关于该选题的研究现状及趋势 1 研究现状 青枯病是由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的一种世界性的土传细菌性病害[1]，1880年首次发现于美国北卡罗来纳州格兰维尔。该病原有着广泛的寄主范围及地理分布，广泛分布于热带、亚热带及温带地区，给作物生产带来巨大经济损失，对我国南方各省市造成的危害尤为严重。Ralstonia solanacearum 菌系复杂，寄主广泛，除危害番茄外，还可侵染包括烟草、花生、香蕉等在内的50多个科、200多种植物 ，其中马铃薯、番茄、烟草等茄科作物受害最为严重[2]。 几十年来，对于胞外蛋白功能的研究一直是个世界性的难题，且倍受重视，国内外对此都做了大量的研究。青枯雷尔氏菌合成大概10种主要的胞外蛋白（exoprotein)，在实验室青枯雷尔氏菌发酵液上清液中可轻易地检测到这些蛋白[3~6]，尽管有些胞外蛋白的生产量很少，其产生条件也不尽相同[7]，但正是由于这些微量蛋白之间的相互协同作用，对青枯雷尔氏菌引起植株发病起着不可或缺的作用。目前，对青枯雷尔氏菌胞外蛋白的研究呈多元化趋势，对其致病性机理的相关报道也比较多，但对其致病成分尚无准确定论，对其特定单一胞外蛋白的功能目前还尚不清楚，指纹图谱方面的研究也正在逐步深入。 1.1 青枯病是茄科作物上重要的细菌病害，其发生流行因素较为复杂，在我国河南、山东、江苏、云南、广西、湖南、广东、福建等省普遍发生，华南地区尤为严重。青枯雷尔氏菌的发生因素十分复杂，与气候、土壤、栽培和生物等因素有关，各因素之间存在着相互作用，一个原来为青枯雷尔氏菌发生的主导因素，因其他因素的影响可以转化为次要因素。发生因素的多态性，使得青枯雷尔氏菌表现出发生危害不确定性。 近年来，在一些些茄科作物主产地区，青枯病不断扩展蔓延危害尤为严重，一般发病率在20%～40 %。青枯病的病菌主要随残株在土壤中过冬，能存活数年，高温（30°C）、高湿（90%）、多雨是诱使青枯病发生和流行的主要因素，尤其是雨后转晴，太阳暴晒，土温升高，气温达30-37℃，最有利于青枯病流行。发病后，在苗的胚轴和茎中部的青枯雷尔氏菌含菌量高达109~1010cfu/g[8~11]。染病植株比健株稍矮，叶色较淡，在高温晴朗的白天病株嫩茎和叶片自上而下萎垂，夜间尚可恢复，经3~4天或更短时间全株茎叶萎蔫枯死，但病株在短期内仍保持青绿颜色，叶片也不脱落。横切病株茎部可见维管束变褐，用手挤压有污白色菌脓从切口处溢出，这是体内寄生的病原细菌溢脓。田间可以用这种方法快速诊断青枯病。青枯病是一种较难防治的病害，目前宜采取选用抗病品种，加强栽培控病措施为主，适当结合施药的综合防治措施。当然，各国科学家也正在努力研制新型高效的植物疫苗，以期减少或彻底解决作物青枯病的危害。 1.2 青枯雷尔氏菌胞外蛋白及其分子致病机理 [12~14]。N -乙酰(2-氨基-2-半乳糖)(Akiyama Y 等)-羟基棕榈酸甲基酯引发的PhcA系统控制，3 羟基棕榈酸甲基酯信号水平随细菌密度变化而变化，以PhcA调节基因的启动和转录为核心，自动而精密地调节青枯菌中有关致病基因的表达和关闭，并由此控制细菌的生长状态[15]。然而，另一些科学工作者则认为青枯雷尔氏菌的致病基因在质体上，且在培养过程中致病性（如番茄青枯菌）容易丧失[16~18]，再加上其数量有限，因此给分离研究工作带来了极大的困难。[19]。 MW为60~120×106d）MW为60~120×105d）()。14种寄主植物的51个野生型青枯菌内生质体，并对其中20个野生型（毒力株）和20个突变型（非毒力株）进行了比较研究，发现其中14株野生型和10株突变型菌株均含分子量大小相同的有1~2个质粒；其中有些菌株（野生型或突变型）不存在质粒；有些野生型毒力株不含质粒，而其衍生突变型无毒力株则出现质粒。前两种情况表明