有机堆肥中沙门氏杆菌之检验方法-农业药物毒物试验所.PDF

有機堆肥中有機堆肥中沙門氏桿菌沙門氏桿菌之檢驗方法之檢驗方法 有機堆肥中有機堆肥中沙門氏桿菌沙門氏桿菌之檢驗方法之檢驗方法 羅致逑、許齡尹、陳淑娟 前 前 言言 前前 言言 有機農業操作大量使用有機堆肥，以使蔬菜生長良好。依過去20年美國調查 顯示有機肥料中曾被檢出有致病菌存在。有機肥料大部份以禽畜糞為原料，如我 國肥料品目5-09之禽畜糞堆肥，及品目5-11之雜項堆肥等。在正確的堆肥過程中， 人畜共通致病菌會因熱與高溫而消失，但堆肥操作不謹慎，仍可能會有少量或部 份的病原菌存活，一旦施用後即會附著在新鮮蔬果上繼續生長造成中毒。美國環 境保護署與農部要求有機堆肥中沙門氏桿菌需低於3MPN/4克(乾重) 。歐盟要求有 機堆肥中沙門氏桿菌不得檢出(25克) 。在我國有機堆肥中尚未列入對人畜共同性 致病菌的檢驗項目。 本所於100~101年抽檢14種市售有機堆肥品牌，其中有少數品牌含有李斯特 菌與糞生大腸桿菌，顯示部份廠商在製造有機堆肥的過程有困難。因此建立有機 堆肥中人畜共通致病菌之檢驗非常重要。 有機堆肥中沙門氏桿菌有機堆肥中沙門氏桿菌之檢驗方法之檢驗方法 有機堆肥中有機堆肥中沙門氏桿菌沙門氏桿菌之檢驗方法之檢驗方法 1.適用範圍：本方法適用於有機堆肥中沙門氏桿菌之檢驗。 2.檢驗方法：檢體經系列稀釋後，以三階五重複進行培養，配合MPN計數之方法。 2.1 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光 以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每15分鐘落菌數 不得超過15 CFU/培養皿。本方法因使用第二級危險群微生物(Risk group 2, RG2) ，需依生物安全等級規範第二級(Biosafety level 2, BSL 2)在P2 級實驗室 中操作。 2.2 器具及材料 2.2.1 無菌匙。 行政院農業委員會農業藥物毒物試驗所技術專刊第223 號。 - 1 - 2.2.2 冰箱：能維持5 ± 3℃者。 2.2.3 扁鏟。 2.2.4 試管：硼矽玻璃，25×150 mm ，與16×100 mm ，附可高溫高壓滅菌螺 帽，或其他適用者。 2.2.5 試管架：放置試管。 2.2.6 吸管：已滅菌，硼矽玻璃或塑膠製。 2.2.7 自動分注器(Automatic pipettor) 。 2.2.8 接種環：直徑約3 mm ，鉑絲或可拋棄式者。 2.2.9 拋棄式無菌塗抹棒。 2.2.10 酒精燈。 2.2.11 培養箱：能維持內部溫度溫差在± 1.0℃以內者。 2.2.12 培養皿：已滅菌，微生物等級，15 mm×100 mm 。 2.2.13 載玻片。 2.2.14 三角錐形瓶：500 mL 。 2.2.15 水浴：能維持水溫50℃者。 2.2.16 過濾：孔徑0.22 µm 之注射過濾器。 2.2.17 放大鏡。 2.2.18 乳膠手套。 2.2.19 酸鹼度測定儀(pH meter) 。 2.2.20 漩渦混合器(Vortex mixer) 。 2.2.21 微量分注器(Micro pipettor) 。 2.2.22 吸管尖(Pipet tips) ：可分注30 µL 。 2.2.23 燒杯：玻璃或塑料製成，大小各異。 2.2.24 高壓滅菌釜：121℃ ，15 PSI 。 2.2.25 天平：可稱量到2,000 g者，靈敏度為0.1 g 。 2.2.26 加熱板(Hot plate) ：具有磁性攪拌功能。 2.2.27 攪拌均質器(Blender)或鐵胃(Stomacher) ：能適用於無菌操作者。 2.3 試劑及標準品 2.3.1 試劑之純度：在所有的測試中，必須使用試劑級(Reagent-grade)化學品。 2.3.2 盡可能使用商品級的培養基以控管品質。 - 2 - 2.3