酶联免疫吸附测定（ELISA）需要注意的问题.pdfVIP

·48 · 粮油仓储科技通讯2012(2) 粮油检测与加工 酶联免疫吸附测定(ELISA)需要注意的问题 毕文庆 张家林 党保华 (平顶山市粮油产品质量监督检验所 467000) 由于酶联免疫吸附测定(ELISA)具有样品前处 4 沮 度和 湿 度 理简便、快速准确、所需仪器廉价等优点，已广泛应 用于免疫学检验 的各领域中。国家标准 GB／T 温度的差别会使板孔之间反应速度差别很大， 5009．111—2003、GB／T 5009．22—2003规定 了 因此应该将板子放置在靠近测温探头的位置，避免 ELISA方法作为粮食行业中呕吐毒素、黄曲霉毒素 放置在培养箱出风 口附近，确保温度稳定、一致。为 B1检测的标准方法之一。 避免蒸发，应在板子上加盖，也可用塑料贴封纸或保 粮食行业中采用的是ELISA方法中的间接法， 鲜膜覆盖板孔，还可以将 ELISA板放在传热性 良 基本步骤是 ：①将抗原吸附于固相载体表面；②加抗 好、盒底垫湿纱布的湿盒内(湿盒应提前放在培养箱 体，形成抗原一抗体复合物；③加酶标抗体；④加底 内)。 物，底物被酶催化成为有色产物，根据呈色的深浅进 5 加 样 行定性或定量分析抗体量。 然而，影响ELISA试验结果的因素很多，故加 加液速度影响各微孔之间反应时间的一致性， 强各个环节的质量保证才能充分发挥其优点。下面 加液量的准确性，直接影响检测数据的结果。操作 根据常用的试剂盒谈谈ELISA中的一些注意事项。 者可以通过采用 12孔、24孔板多练习以提高熟练 程度。加样过程尽可能保持速度均匀、顺序一致，以 1 回温 保证所有反应孔的反应时间一致，保证加液快速而 常用的试剂盒说明书中都提到低温储存，使用 准确，尤其是显色和终止反应，加液速度的影响是最 前恢复到室温，但这里所说的室温并没有明确规定， 大的。另外，加样 时还应注意将所加物滴加到 经验证明日常的2O℃～25℃的室温并不十分适合， ELISA板孔的底部，但枪头不可触及微孔内液面和 因为较高的温度对于操作者，尤其是生手来说，会使 微孔底部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 孔与孔之间产生很大的差别，影响结果。因此，我们 6 水 建议采用尽量低的温度，具体温度以洗涤液中的结 晶通过充分的振摇能够完全溶解为准。 试验中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤 的，应为新鲜的和高质量的，避免其他微生物的污 2 振 摇 染。 振摇作为试验中一个简单的步骤在试剂盒回 7 洗 涤 温、洗板中起着很重要的作用。充分的振摇可以使 试剂均匀、反应充分、洗涤彻底。 洗涤也是试验中很重要的一个环节。ELISA 中抗体、酶标记物的加入都是过量的，通过洗涤以清 3 稀 释 除残留的物质。洗涤过程中尤其要注意四个因素： 由于试验过程中微小的偏差都会导致测量结果 一 是洗涤液在不溢出的前提下尽量多加，这样洗涤 出现严重的错误，因此在试验中洗涤液和抗体 (抗