兔虹膜色素上皮细胞和视网膜色素上皮细胞VEGF及其受体FLK-1 mRNA表达的对比研究.pdfVIP

中文摘要 目 的 虹膜色素上皮(IPE)细胞与视网膜色素上皮(RPE)细胞具有 相同的胚胎发育来源，基本具备RPE细胞的生理功能，且取材方 便，可望替代RPE细胞实现自体移植，治疗老年性黄斑变性 (ARMD)、视网膜色素变性、黄斑营养不良等疾病。我们采用逆转 及其受体之一FLK一1mRNA的表达进行检测和对比，为IPE细 胞代替RPE细胞移植提供理论依据。 方 法 实验动物：健康成年有色家兔。 IPE细胞和RPE细胞的分离：摘取家兔眼球，无菌操作下沿角 管内，立即放入干冰中并于一80℃保存备用。 两种细胞的总RNA。 RNA分别逆转录生成eDNA。PCRt以逆转录产物为模板，以13一 aetin为内参，甩PCR扩增各目的基因。 PCR产物电泳及定量分析：取PCR产物进行琼脂糖凝胶电 泳，凝胶图像分析软件分析并计算目的基因mRNA的相对含量。 以上实验重复四次，所得结果作两样本均数差异的t检验。 7结 果 RNA样品鉴定：本实验所提取的总RNA完整，无明显降解。 RT—PCR产物定性表达及定量分析：兔眼IPE细胞和RPE细 胞均可表达VEGF和FLK一1mRNA。IPE细胞的、倔GF和FLK一 1 mRNA含量。IPE mlLNA含量低于RPE细胞的、，EGF和FIX一1 mRNA的表达量约为RPE细胞的52．36％，经统计学分析，结果 有显著性差异。 ～ P论 渗出性ARMD患者视网膜下新生血管是导致视力下降的主 要危险因素。新生血管来自脉络膜，穿过Bmch膜侵人视网膜 下，最终形成脉络膜新生血管膜(CNvM)，并有渗漏，导致视力损 害。VEGF在CNVM的形成和发展中是一个至关重要的血管源性 生长因子。VEGF在ARMD患者的RPE细胞中表达水平增高，可 能与此病的早期发病机制有关。Iu)E细胞分泌的VEGF可以影晌 ARMD患者中CNVM的发生过程。大鼠RPE细胞短期过度表达 VEGF足以诱导脉络膜新生血管形成(CNV)。 同种异体掰E细胞移植失败的主要原因是发生免疫排斥反 应，而自体RPE细胞取材困难，由于来自患者自身明显病变磁)E 细胞的周围同种细胞，很可能也具有基因的缺陷，因此用于移植不 够理想。体外研究已表明，观细胞基本具备RPE细胞的形态特 征、维生索A代谢、视细胞外节盘膜的吞噬、物质转运等维持视力 的重要生理功能，且自体I】曜细胞很易从自体的虹膜切除术取得， ．2． 可望成为RPE细胞合适的替代物。目前关于IPE细胞血管源性 生长因子表达方面的研究鲜见报道。本实验对IPE细胞和RPE 细胞VEGF及其受体FLK一1mRNA的表达情况进行了检测。结 果表明，IPE细胞和RPE细胞均可表达VEGF和FLK一1 mRNA； IPE细胞的VEGF和FLK一1 mRNA含量明显低于RPE细胞的 VEGF和FLK一1 mRNA含量。IPE细胞代替RPE细胞移植到视 网膜下可能会在刺激脉络膜或视网膜新生血管生成方面的作用小 于RPE细胞。VEGF及其受体在RPE细胞中表达在视网膜前膜 的生成中起重要作用。因此我们认为，IPE细胞血管源性生长因 子的mRNA表达水平铳艉PE细胞低，IPE细胞移植用于治疗 ARMD可能会更有利。17 关键词：色素上皮，银；逆转录聚合酶链反应；血管内皮生长因 子 ·3· and VEGF mRNA