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沼生花褶伞的生物学特性及其毒性研究 摘 要 本文以发现于湖南长沙的我国新记录种——沼生花褶伞为实验 材料，利用菌种分离技术、光镜技术、电镜技术、高效液相色谱技术、 毒理实验技术、电生理等技术手段，对沼生花褶伞的生物学特性和毒 性进行了研究。主要包括内容：沼生花褶伞的生态学和组织学特征， 菌种分离培养，菌丝体及子实体荧光染色方法的建立，子实体的栽培， 对植物和动物的毒性研究，毒素的分离和鉴定，获得了如下的结果： 1．通过野外生态调查和利用光学显微镜，电子显微镜对沼生花褶 伞进行了生态学和组织学的研究。沼生花褶伞是一种群生的草腐生 菌，在相对稳定的生态条件下，子实体发生适宜温度26～32℃，相对 湿度50～80％，降雨量30％以上，温度是主导因子。每年在春末夏初 高温阵雨之后为盛生长期。担孢子为柠檬状，表面光滑，黑色，菌褶 菌丝有锁状联合，褶缘囊状体发达。 2．以碳源、氮源、温度、PH值单因子实验设计培养条件，对沼生 花褶伞菌丝体进行培养。通过对菌丝体直径测定及生长势分析，优化 筛选出沼生花褶伞菌种培养的最适培养基为牛粪汁培养基：蔗糖209， 0．59，琼脂209， 加发酵牛粪浸出液至1000ml，最适温度为28℃，最佳PH值为7．8， 并证明蛋白胨，尿素为最佳氮源，蔗糖和玉米粉为最佳碳源。 white 对沼生花褶伞菌丝体及子实体进行复合染色。CalcourwhRc在沼生花 褶伞菌丝体观察过程中的最佳浓度0．0005％，而核荧光染料 u Hoechst33258的最佳PH为7．0，最佳浓度为10 g／ml。爬片2／5菌丝 体的核荧光染色为最佳。 4．通过组织分离，无菌操作切取菌柄与菌盖交接处的小块组织， 即可得到菌种。母种制备用牛粪汁培养基，麦粒培养基用原种培养基， 而栽培时则用堆制发酵的粪草，播种的采用层播发菌，成功的在室内 栽培出了沼生花褶伞的子实体。子实体出菇的温度要低于菌丝生长的 最适温度，培养料的含水量在60％左右，在子实体形成期需要充足的 光线。 5．、钡0定了不同浓度粗毒对绿豆种子下胚轴生长的影响，水稻叶绿 素含量和MDA含量的变化曲线，证明在粗毒浓度50mg／L以上有明 显抑制下胚轴的生长。在此浓度下的菌丝体提取液可使处理10天后 水稻的叶绿素含量下降45．01％，MDA含量上升83．45％，而子实体提 取液则分别则为18．78％和17．43％。结果表明菌丝体提取液可明显影 响植物的生长，促进叶片的衰老，而子实体提取液的影响则要求小得 多，因而初步证明了菌丝体中可能含有某些物质可抑制植物的生长。 用沼生花褶伞粗毒对美洲蜚蠊进行腹腔注射，小鼠脑室注射，蟾 蜍坐骨腓肠肌，蛙心灌流实验，可检测该粗毒液的毒性。结果表明， 沼生花褶伞对昆虫的毒性不明显，对哺乳动物有一定的毒性，含有一 定含量的神经致幻毒素裸盖菇素，蛙心灌流的实验证明粗毒中可能含 有一定的拟胆碱成分。 明其中含有裸盖菇素。运用HPLC分离子实体中的神经毒素，得到2 个组分，将他们分别收集，冻干后用于质谱分析。结果l号组分的分 子量为299．4，与文献中裸盖菇素分子量相同，2号组分分子量为 401．2，为未知成分。MS分析证明了沼生花褶伞中含有神经致幻毒素 裸盖菇素。 关键词：沼生花褶伞，培养基，菌丝体，栽培，粗毒，裸盖菇素 II on Characteristicsand Studies Biological ofPanaeolus Toxicity paludosus Abstract