胆囊癌肝脏侵袭和转移动物模型的建立和初步评估.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 我国胆囊癌在消化道肿瘤中居第五位，是胆道系统中最常见的恶性肿瘤。胆 囊癌的恶性程度较高，具有生长快，转移早和预后差的特点。近年来，胆囊癌发 病率明显升高，而且胆囊癌缺乏特异性的症状和体征，临床诊断时常常已经是晚 期，预后非常差。胆囊癌的治疗一直是临床上的难题，近年来诊治方面没有明显 进展。开展胆囊癌相关基础与临床研究、提高胆囊癌的诊治水平是胆道外科迫切 的任务。 胆囊癌早期发生侵袭和转移是恶劣预后的主要原因。目前，在消化道肿瘤基 础研究领域，如肝癌，胃癌结，直肠癌，胰腺癌等的原位移植及肝转移模型的建 立方面报道较多，而在胆囊癌侵袭和转移动物模型方面却鲜有报道。由于缺乏合 适的研究工具，国内胆囊癌的基础和临床研究既不系统也不深入，前瞻性、试验 性研究较少，深度和广度远远落后于其他肿瘤的研究水平。本实验通过建立胆囊 癌肝脏侵袭和播散转移动物模型，深入了解胆囊癌侵袭和转移的生物学特性，并 可能为临床进行各种干预肿瘤侵袭和转移提供试验平台以及研究其它肿瘤提供 一定的参考意义。 总之，胆囊癌由于预后恶劣、发病率逐年增高，应该对其足够重视和深入研 究。肿瘤的侵袭和转移是研究的重点，建立合适的体内研究模型，为今后研究胆 道肿瘤进展的分子机制，开发有效的化疗药物等几个方面提供理想试验平台。 第一部分胆囊癌肝脏侵袭模型的建立 肿瘤的恶性行为表现为瘤细胞侵袭性破坏宿主组织和向远处转移，而肿瘤转 移之前，一般在原发部位先发生侵袭生长，侵袭可直接或问接引起转移导致宿主 死亡，故侵袭性是肿瘤恶性行为主要特征之～。由于肝脏和胆囊的特殊位置关系， 根据术后和尸检，胆囊癌的主要播散方式是直接侵袭，其中对肝脏胆囊窝的侵袭 出现率为60--80％。评价肿瘤侵袭性的实验方法较多，鉴于胆囊癌的以上特点， 本实验选择建立胆囊癌肝侵袭模型，来研究胆囊癌体内侵袭过程。 将胆囊癌细胞株(GBC—SD)，培养扩增，调整瘤细胞悬液，浓度约为J07个活 细胞／0．2ml，分别接种于裸鼠的双侧腋部背侧皮下。于接种2周后，肿瘤直径约 中文摘要 lcm，取出皮下瘤，制备成直径0．5锄f瘤块，分别分次接种于10只裸鼠的肝包膜 下。在第一批接种45天后行剖腹检查。在肝实质内发现明显增大的肿瘤，且肿 瘤周边对肝脏产生了不同程度的侵袭。 本实验成功的建立了胆囊癌肝脏侵袭模型，整个实验模拟了肿瘤细胞脱离原 发瘤群体，向周围组织侵袭生长的过程，是研究肿瘤转移过程必不可少的部分。 第二部分胆囊癌肝转移模型的建立 在临床上，胆囊癌血行播散的主要部位是肝脏，占64％，其次是肺和骨， 分别占24％和12％。由于裸鼠胆囊很小，胆囊壁薄，进行原位移植模拟整个转 移过程的实验难度极大，且一般原位移植的发生肝转移相对较少。脾脏种植法肝 转移发展过程较快，肝内转移发生率相对较高，因此脾脏种植法是建立裸鼠体内 胆囊癌肝转移模型较为理想的方法。 将胆囊癌细胞株(GBC—SD)，培养扩增，调整细胞悬液，浓度约为106个活细 胞／50ul，在每个裸鼠脾内注入50ul细胞悬液后关腹。待裸鼠饲养至45天时， 将lO只裸鼠全部麻醉后行剖腹探查，发现三只裸鼠伴肝脏转移，其中1只发生 脾脏转移，另1只发生胃转移。另外7只裸鼠关腹后继续饲养，待60天后，再 次剖腹探查发现另有两只裸鼠发生肝转移，其它脏器无转移。余下5只裸鼠饲养 至90天仍未发现肝脏转移。本实验建立模型的肝转移率是50％。 所以，本实验成功的建立了胆囊癌肝转移动物模型，模拟了瘤细胞入血之后 直至产生转移结节的全过程。对于今后研究和干预胆囊癌的肝脏转移有较大帮 助。 第三部 裸鼠肝脏侵袭和转移动物模型的初步评估和量化 模型的建立只是整个肿瘤研究工作中的一个部分，而且动物模型也是肿瘤 研究工作中的一个不可或缺的工具，所以我们有必须要对其进行量化，为以后肿 瘤相关基因以及抗肿瘤药物筛选提供一个理想的实验平台。 剖腹详细探查是量化工作的基础，可以发现转移灶以及受侵犯的脏器。在 动物生长过程中对模型的监测，我们弓1入影像学的检查方法，包括CT和MRI， 这对于整个实验的连续性很重要。利用组织学半定量的分级法对侵袭模型进行量 中文摘要 化。