转植酸酶基因（phyA2）玉米定性、定量PCR检测.pdfVIP

… Onlinesystem：http：／w／ww．jabiotech．org 袭鼗生惰技甫学撤 1 ．．… ， 农 业 生 物 技 术 学 报 JournalofAgriculturalBiotechnol0gy 隔怒艘『 2012，20(4)：356～361 雹翟 DOI：10．3969／j．issn．1674·7968．2012．04．003 研究报告 Le~er 转植酸酶基N(phyA2)~米定性、定量PCR检测 于彩虹 田少亭 路兴波 z 李凡 z 杨淑珂 孙红炜 1中困矿、f大学(4L京)化学与环境工 学院，北京 100083；2III东省农、I科学院植物保护研究所，济南250100 通讯作者，hongweisun@126．tom 摘 要 转植酸酶基因玉米检测是对转植酸酶基因玉米释放进行有效监管的重要前提和技术支撑。本研 究根据转植酸酶基因玉米(Zeam )外源植酸酶基因p2序列设计基因特异性引物，进行了定性、定量 PCR检测。定性结果显示，该引物可有效检测植酸酶玉米中p 2基因，而在其他不含植酸酶基 的材 料中则检测不到相应基因，表明该引物具有很高的特异性 。以玉米内标准基因玉米淀粉合酶芹构体 zSTSH-2基凶(zSSIIb)~H植酸酶基因p似2为对象，进行 SYBRGreenI染料法荧光定量 PCR反应 ，绘制2 种基因扩增循环数 ．拷贝数标准曲线图，根据混合样品巾 SS，，6)和植酸酶基因p 2的拷贝数计算样品 叶1的转基因含量，并做熔解 曲线分析。结果表 明，zS ，6和 p 2标准 曲线相关系数分别为0．998和 0．995，相关性较好，两个基因的熔解 曲线均呈单峰型，表明引物特异性较强，混合玉米样品(植酸酶下米含 量分别为 l％、0．5％和 0．1％)中植酸酶玉米含量分别为 1．1％、0．54％~110．17％，实测值 理论值接近 。小研 究建立了转植酸酶基因玉米定性、定量 PCR检测体系，町有效地对转植酸酶基因玉米进行榆测。 关键词 转植酸酶基因玉米，定性PCR，定量PCR，zSSIIb，植酸酶基凶(phyA2) QualitativeandQuantitativePCR DetectionofthePhytase hyA2) m1ransgen1C‘，^、orn YU Cai—Hong TIAN Shao—Ting LU Xing-Bo LIFan2 YANG Shu—Ke SUN Hong—W ei 1SchoolofChemicalEnvironmentalEngineering，ChinaUniversityofMiningTechnology(Beijing)，Beijing100083，China；2Instituteof PlantProtection，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250100，China Correspondingauthor，hongweisun@126．com Abstract Thedetectionofphytasetransgenic corn isimportanttosuperviseitsreleaseandprovidestechnical support．Accordingtophytasegene (phya2)sequencesintransgenicphyA2com (Zeamays)，theprimersfor qua