山地杨MD-110原生质体的分离技术.pdfVIP

湖南林业科技 2008年第35卷第1期 硼究报告 山地杨MD一1 10原生质体的分离技术 蒋祥娥 ，蔡 桁 ，赵弘越 ，冈村政则 (1．湖北省林木育种科学技术中心，湖北武汉 430079； 2．湖北省武昌实验中学，湖北武汉 430061) 摘 要：山地杨MD—ll0(P maximowiczii× deltoides)是黑杨派与青杨派的优良杂交品种。选择生长约1个月无菌 苗的健壮叶片(长1．5～2 Crl1)，切成长约0．5 mm的细条，在2％纤维素酶RS、0．05％果胶酶Y_23、0．6 M甘露醇(pH =5．6)组成的酶液进行分离，分离出大量的具有活力的原生质体，且大小均匀，细胞膜完整；酶解2 h后轻轻摇动培 养皿利于酶解，酶解时间以6 h为宜。纯化后其原生质体的产量为3．6×10 ／ ．wt，活力可达90％以上。纯化后的 原生质体在B，(2倍浓度)培养基，附加2，4-D 10 mg·L一、NAA 0．2 mg·L 和BAP 1 mg·L 中进行高密度液体 浅层培养。 关键词：山地杨MD-I10；原生质体；分离技术；酶解：纯化；培养 中图分类号：S 722．3 7 文献标识码：B 文章编号：1003—5710(2008)01—0014—02 原生质体培养是20世纪80年代的一个研究热 进行水培。3周后休眠芽开始萌动，4周后长出新 点，日本和中国在这一领域做出了较大的贡献，日本 枝，取新枝上的腋芽，用70％酒精消毒1 min后，再 科学家成功地进行了大约70个植物品种的原生质 用次氯酸钠稀释5倍加Tween-201滴，消毒10 min 体培养…，我国获得了30个以上品种的原生质体再 后，用无菌水冲洗7遍。接种于MS+BAP 1．15 生植株。林木原生质体培养起步较晚，到目前为止， mg·L +蔗糖2．5％+琼脂0．75％的初代培养基 有12个树种、杂种或无性系获得了原生质体的再生 中，4～5 d后，腋芽开始萌动，在基部产生少量愈伤 植株，包括檀香、先锋榆、北美鹅掌楸、欧洲黑杨×毛 组织。接种7 d后，腋芽开始伸长，并进一步形成少 果杨、欧洲山杨、银白杨×大齿杨、白云杉、毛白杨、 量丛生芽。当丛生芽长到1．5～2 cm时，将丛生芽 悬铃木、白花泡桐、欧洲黑杨×辽杨和桑树 J。但 剥离成单芽。将长得较高具有3～4个茎节的单芽， 是林木原生质体培养仍存在着很大的困难，能够获 切分为2～3段作为继代材料接种到分化培养基中。 得再生植株的树种很少。杨树是我国重要的速生用 分化培养基为1／2(N)MS+BAP 0．30 mg·L + 材树种之一，jJJ地杨MD一1 10是黑杨派与青杨派的 NAA 0．10 mg·L +蔗糖2．5％，培养后得到大量 优良杂交品种，具有父本黑杨生长快的特点，也具有 的丛生芽，当丛生芽伸长到3～4 cm时，从基部切 母本青杨抗干旱瘠薄的优良特性，在海拔800 in左 下，转至生根培养基中。生根培养基是1／2(N)MS 右的高山地区，牛长特别好。该品种扦插造林即可 +NAA 0．05 mg·L +蔗糖2．5％，接人生根培养 成活，在其适生环境中，年均高生长量大于3 m、胸 基3周后发育成完整植株，可得到大量具有良好根 径生长大于3．5 Cnl，为纸浆和人造板加工首选用材， 系的试管苗。通过以上培养建立了山地杨的快繁体 是山区快速绿化和致富的新品种。本文主要介绍山 系 地杨MD一110无菌苗的培养和原生质体