通心络对糖尿病心肌病大鼠血流动力学及心肌细胞凋亡影响.docVIP

通心络对糖尿病心肌病大鼠血流动力学及心肌细胞凋亡影响【摘要】目的:探讨通心络对糖尿病心肌病大鼠血流动力学及心肌细胞凋亡的影响,为临床用药提供实验依据。方法:取SD大鼠随机分为3组:正常对照组,糖尿病心肌病变组(Diabetic Myocardi-opathy,DCM组)和通心络干预组(TXL组)。第12周末测定大鼠心室内压及分析心功能。采用Tunel法检测光镜下观察心肌细胞凋亡指数,免疫组化法测定Bcl-2,Bax及P53基因蛋白表达。结果:TXL组治疗组左室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)明显高于DCM组,通心络减少P53、Bax的表达,增加Bcl-2表达,抑制细胞凋亡指数。结论:通心络可以改善糖尿病心肌病大鼠左心室功能,同时通过多种途径有效减少糖尿病大鼠心肌细胞凋亡。 【关键词】通心络;糖尿病心肌病;心功能;细胞凋亡 【中图分类号】R285.5 【文献标识码】B 【文章编号】1008-6455(2010)08-0165-02 糖尿病心肌病(DCM)是指糖尿病患者心肌细胞原发性损伤引起广泛的结构异常,最终引起左心室肥厚、舒张期和(或)收缩期功能障碍的一种疾病状态??[1]?,由Rubler于1972年最早提出。本实验观察了通心络对糖尿病心肌病大鼠左心室功能及心肌细胞凋亡的影响,为该药在糖尿病心肌病的临床应用中提供依据。? 1 对象和方法 1.1 对象:2月龄健康雄性SD大鼠(180-200g)42只由(辽宁医学院实验动物中心提供);链脲佐菌素(STZ)购自(美国Sigma公司);通心络(河北以岭药业提供);MedLab生物信号采集处理系统(南京美易公司);TUNEL试剂盒购自(北京博奥森生物技术有限公司);P53、Bax、Bcl-2兔抗小鼠单克隆抗体购自(北京中杉金桥生物有限公司)。 1.2 模型与分组:健康雄性SD大鼠42只,随机分出8只作为正常对照组,其余以45mgKg??-1?一次性尾静脉注射1%STZ溶液,正常对照组注入等量容积上述缓冲液。注射后72h采尾静脉血测血糖,血糖浓度大于16.7mmoll??-1?者为糖尿病大鼠模型。 糖尿病模型形成后,普通饲料喂食6周,随机抽取大鼠10只,取心肌组织观察微细结构,糖尿病心肌病变模型形成标准为 :心肌肌原纤维排列紊乱,局部断裂明显,肌丝成分减少,间质胶原纤维增生;心肌内微血管内皮细胞明显肿胀,核染色质边集,基底膜出现不规则明显增厚,微血管瘤形成;线粒体肿胀变形、嵴稀疏,排列紊乱,结构不清。余24只糖尿病大鼠随机分为两组:糖尿病心肌病变对照组(DCM组)和通心络干预组(TXL组)。 糖尿病大鼠心肌病变模型制备成功后,TXL组(12只)用通心络超微粉(1.43g生药/g干粉)0.5gkg??-1??d??-1?,每天灌胃一次;正常对照组(8只)和DCM组(12只)等容量纯净水每天灌胃一次。连续6周。 1.3 指标测定:心室内压的测定:第12周末,各组大鼠用质量分数为20%的乌拉坦溶液5 mlKg??-1?腹腔注射麻醉,仰卧固定,颈正中切口,气管插管;手术游离右颈总动脉,动物肝素化后,经右颈总动脉向左心室插入自制的心室插管(d=1.5 mm,充满质量分数为1%的肝素溶液),稳定20 min后,用MedLab生物信号采集处理系统记录左心收缩压(LVSP)和左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)。 心肌细胞凋亡测定:大鼠心肌常规石蜡切片后,心肌细胞凋亡按末端脱氧核苷酸转移酶(TdT酶)介导的带荧光的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)标记凋亡细胞核的3,末端每只大鼠随机取4张切片观察,每张切片计数5个高倍视野(400×)中的凋亡阳性细胞核数/总细胞核数,取其平均值为细胞凋亡指数。Bcl-2,Bax及P53基因蛋白表达按试剂盒说明书免疫组织化学染色法检测。每只大鼠随机取5张切片观察,每张切片计数5个高倍视野(400×),计算其平均灰度值。 1.4 统计分析:计量资料用(x±s)表示,组间差异比较用方差分析,两组间比较用LSD法。? 2 结果 2.1 大鼠的一般情况:大鼠尾静脉注射STZ72小时,血糖均大于16.7mmoll??-1?,大鼠糖尿病模型制备成功。6周后随机抽取大鼠观察微细结构证实大鼠糖尿病心肌病变模型制备成功。DCM组因感染或糖尿病加重死亡4只,余8只进入实验;TXL组麻醉过重死亡2只,用药过程中死亡2只,可能由于灌胃操作不当或者通心络含蜈蚣,全蝎等有毒成分所致,余8只进入实验;正常对照组无大鼠死亡。 2.2 血流动力学变化:与正常对照组相比,TXL组和DCM组LVSP、±dp/dtm