类蛋白反应修饰海地瓜酶解物及ace 抑制肽的制备 - chemical journal .pdf

Vol.35 高等 学校 化 学 学报 No.5 2014年5月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 965~970 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 类蛋白反应修饰海地瓜酶解物及 ACE抑制肽的制备 沈晴晴,曾名湧,赵元晖 (中国海洋大学食品科学与工程学院,青岛266003) 摘要摇 采用类蛋白反应修饰海地瓜体壁蛋白酶解物,制得修饰肽的血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性与原 酶解液的活性相比显著提高;模拟消化实验结果表明,修饰肽与胃肠蛋白酶作用后可增强其降压活性;细胞 毒性实验结果表明,样品浓度在低于10 mg/ mL 时对犬肾细胞(MDCK)无毒性,且低浓度可以促进细胞生 长. 采用超滤、Sephadex G鄄15凝胶柱层析和RP鄄HPLC等分离技术纯化修饰产物,得到高活性 ACE抑制肽 (IC 值为3郾67 滋mol/ L),序列结构为NQNFVQYTTNT. 紫外光谱分析结果表明,修饰肽与ACE 结合可引起 50 吸光度变化. 用SYBYL软件对抑制肽与ACE活性位点进行模拟对接,发现该抑制肽能与ACE很好地结合. 关键词摇 海地瓜;类蛋白反应修饰;分离纯化;ACE抑制肽 中图分类号摇 O629郾72摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A [1] 类蛋白反应是1902年Danilevski通过在蛋白水解液中添加凝乳蛋白酶导致沉淀产生发现的 ,又 称合成类蛋白反应、塑蛋白反应或胃蛋白反应,即蛋白酶催化高浓度蛋白质水解物生成沉淀、触变胶 [2] 体或具有触变性粘稠胶状物的过程 ,可简单看作蛋白质水解反应的逆反应. 反应分 3 步进行: (1)水解底物获得低聚肽;(2)浓缩混合肽; (3)调节浓度、 温度和pH 等并加入蛋白酶进行合成反 [3] [4,5] 应 . 国内对类蛋白修饰反应的研究除探究合适的反应条件外,多集中其应用,Zhao等 通过类蛋 白反应修饰提高酪蛋白ACE抑制活性及大豆蛋白抗氧化活性. 高血压是全球最常见的慢性病,是导致 [6] 心血管病和肾脏病等发生以及死亡的最主要危害因素 . 人体血压调节是由肾素鄄血管紧张素系统 (RAS)和激肽释放酶鄄激肽系统(KKS)共同作用,血管紧张素转换酶(ACE)是这个系统的关键限速 [7] 酶 . 目前常见的降压药物如卡托普利、依那普利等均通过抑制ACE活性降低血压,但易产生赖药性 [8] 及恶心、眩晕和水肿等不良反应 . 因此寻求安全高效的降压药物一直是该领域的研究热点. 许多蛋 [9] 白质及肽类物质已被证明具有促进细胞生长、降血压和抗氧化等生物活性 ,且蛋白质又是人体的营 [10] 养物质,因此常用来获取活性物质和制备多肽材料 . 海地瓜(Acaudina molpadioides)为尻参科海地瓜属动物,价格低廉,常作为海参替代品食用. 研 [11] 究 表明,海地瓜中氨基酸种类和含量丰富,脂质含量低且不饱和脂肪酸较多,属于高蛋白低脂肪食 物. 且