应用6550 q-tof 结合ifunnel 技术对多肽进行高灵敏度分析 - agilent.pdf

应用 6550 Q-TOF 结合 iFunnel 技术 对多肽进行高灵敏度分析 应用报告 作者 前言 Christine A. Miller, Keith Waddell, 在蛋白质的鉴定、分析及定量等领域，灵敏度是蛋白质多肽分析中的一项关键参数。安 Patrick Perkins, and Christian Klein Agilent Technologies, Inc. 捷伦 6550 四极杆飞行时间质谱 (Q-TOF) 结合安捷伦 iFunnel 技术可使多肽分析实现更高的 Santa Clara, CA USA 灵敏度。安捷伦 iFunnel 技术集安捷伦喷射流技术的高效电喷雾离子化和离子聚焦技术、 六孔毛细管取样阵列和两级离子漏斗于一体，提高了离子的采集和传输性能。此项创新 Vadiraja B. Bhat Agilent Technologies, Inc. 技术通过两级离子漏斗中的离轴设计降低了气体负荷及中性背景，与之前不含 iFunnel 技 Wilmington, DE USA 术的四极杆飞行时间质谱相比，选定的分子灵敏度增加了 10 倍。 iFunnel 技术提高仪器灵敏度 x106 LVNEVTEFAK 是一种由胰蛋白酶消化人血 3 清蛋白（HSA）后得到的肽段，本实验以 合成的 LVNEVTEFAK 肽为例，对 iFunnel 技术提高灵敏度的特性进行评估。实验对 安捷伦 1290 Infinity 液相色谱（2.1 x 50 mm 2 色谱柱，流速为 400µL/min）分别与安捷伦 6540 四极杆飞行时间质谱（不含离子漏斗） 及安捷伦 6550 四极杆飞行时间质谱（含 1 离子漏斗）联用进行了对比。两种质谱检 测器均采用安捷伦喷射流离子源，与传统 电喷雾源相比，可通过热梯度离子聚焦技 术使多肽检测的灵敏度增加 3-5 倍。实验 0 同时在两台 Q-TOF 仪器上，以全扫描 MS 1 2 3 4 5 响应 vs 采集时间（分钟） (2 Hz) 模式和目标离子 MS/MS (5 Hz) 模 图 1. ±5 ppm 范围内双电荷多肽 LVNEV TEFAK m/z 575.3111 的提取离子色谱图（EIC）。数据显示基于 式下进行。图 1 所示为合成肽在安捷伦 6550 iFunnel 技术的 Q-TOF 灵敏度增大了 10 倍。 四极杆飞行时间质谱（蓝色线）和安捷伦 6540 四极杆飞行时间质谱（红色线）上的 全扫描结果，表明前者的信号响应高度从 x104 后者的 300,000 增加到了 3 百多万。 6 在目标离子 MS/MS 扫描模式下，只选择 指定的母离子进行 MS/MS 分析。并且在全 5 部分析时间或在选定的保留时间窗口内， MS/MS 分析都具有良好的重现性。因此 4 目标离子 MS/MS 扫描模式可进行全扫数 据的采集，并可通过数据采集后的子离子 3 数据进行定量。图 2 所示为目标离子 MS/ MS 扫描模式下，目标多肽分别在安捷伦 2 6550 四极杆飞行时间质谱（蓝色线）和安 1 捷伦 6540 四极杆飞行时间质谱（红色线） 上的分析结果